[发明专利]用于提高哺乳动物细胞培养物中的抗体生产力并最小化下游、配制过程中的聚集的改进的方法，以及由其获得的稳定抗体制剂

权利要求书

1.制备具有高产量和最小聚集的药物抗原结合蛋白的方法，其中所述抗原结合蛋白是根据SEQ ID 1和SEQ ID 2的抗登革单克隆抗体或者其中所述抗原结合蛋白是根据SEQ ID3和SEQ ID 4的抗狂犬病单克隆抗体，所述方法包含如下步骤：

a)在细胞培养生产培养基中大规模培养表达抗原结合蛋白的哺乳动物细胞，其中该培养步骤有效地维持细胞计数在10×10⁶至20×10⁶个细胞/ml并导致至少2g/L的产量，其中当所述抗原结合蛋白是抗登革单克隆抗体时，所述哺乳动物的细胞系是CHO-K1 SV GS-KO，以及当所述抗原结合蛋白是抗狂犬病单克隆抗体时，所述哺乳动物的细胞系是GS-CHO；其中所述培养步骤包括使用基础培养基、使用浓缩的基础培养基作为补料溶液、使用补料溶液连同明确的补料策略，导致提高的细胞生长、维持较低浓度的乳酸和氨，并且有效地维持细胞计数，从而增加细胞寿命和高产量；

b)从步骤(a)中获得的收获的上清液中纯化抗原结合蛋白，其中该纯化导致至少80％的回收，以及至少99％的纯度，并且其中所述纯化包括顺序方式的亲和色谱、低pH病毒灭活、阳离子交换色谱、阴离子交换色谱、纳米过滤、切向流过滤/超滤，其中所述亲和色谱基质是蛋白A并且其中用于纯化的缓冲剂的盐浓度在30mM-500mM的范围内；以及

c)制备包含所述抗原结合蛋白的稳定的制剂，其中所述制剂的重量摩尔渗透压浓度在300-400mOsm/Kg的范围内，且所述制剂的粘度小于2.5mPa-S；

其中所述制剂包含至少一种抗原结合蛋白、至少一种稳定剂、至少一种缓冲剂、至少一种张度剂和至少一种表面活性剂；

其中所述制剂包含：

i)1-100mg/ml的所述抗原结合蛋白；

ii)20-40mM的组氨酸；

iii)50-100mM的精氨酸；

iv)0.002-0.02％的聚山梨醇酯80(w/v)；

v)50-150mM的NaCl；和

vi)0.1％-2.5％的蔗糖(w/v)；

其中所述制剂的pH为6.5±0.5；并且

其中所得制剂在2-8℃稳定至少9个月，在25℃稳定至少1个月，在40℃稳定至少40天，以及在50℃稳定至少2天。

2.权利要求1的方法，其中所述细胞培养基在所述培养步骤期间至少一次补充有一种或多种其他营养物。

3.权利要求1的方法，其中以包含连续、每天、隔天、每两天及其组合的补充计划补充所述细胞培养培养基。

4.权利要求1的方法，其中所述细胞培养基具有在250-500mOsm/Kg的范围内的重量摩尔渗透压浓度；pH在6.5-7.5的范围内；溶解氧保持在10-60％的范围内；细胞培养温度在30℃至38℃的范围内；葡萄糖浓度维持在7％以下；当活力降低至80％时收获细胞培养物；其中以次级代谢产物如乳酸浓度不超过5g/L，且氨浓度不超过5mMol/L的方式维持细胞培养条件。

5.权利要求4的方法，其中发酵培养基的重量摩尔渗透压浓度为400-500mOsm/kg。

6.权利要求4的方法，其中将发酵培养基的溶解氧维持在20-40％的范围内。

7.权利要求4的方法，其中第一温度为36-37℃。

8.权利要求4的方法，其中第二温度为30-35℃。

9.权利要求4的方法，其中葡萄糖浓度维持在4％和5％之间。

10.权利要求1的方法，其中所述细胞以分批、补料分批、连续模式或灌注模式培养。

11.权利要求10的方法，其中所述细胞以补料分批模式培养。

12.权利要求1的方法，其中用于纯化的缓冲剂的盐浓度在50mM-300mM的范围内。