[发明专利]用于血红蛋白β和镰状血红蛋白β的质谱标准及其用途

权利要求书

1.一种评价经基因修饰的溶血产物样品中镰状细胞突变的矫正水平的方法，其包括：

(a)将所述样品与胰蛋白酶一起温育以获得血红蛋白片段，其中所述血红蛋白片段包含HBB和HBS肽；

(b)通过液相色谱法对经胰蛋白酶处理的样品中的HBB和HBS肽与其它组分进行色谱分离；并且

(c)通过质谱法分析经色谱分离的HBB和HBS肽以确定所述溶血产物样品中的HBB/HBS比率，其中所述HBB/HBS比率是通过比较步骤(c)的质谱结果与标准曲线来确定的，所述标准曲线是由已知比率的包含SEQ ID NO:1(VHLTPEEKS)的合成HBB肽与包含SEQ ID NO:2(VHLTPVEKS)的合成HBS肽的胰蛋白酶消化物的质谱结果生成的。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述标准曲线通过以下步骤生成：

(a)制备一系列标准溶液，其中所述系列的标准溶液的成员含有不同的已知比率的包含SEQ ID NO:1(VHLTPEEKS)的合成HBB肽和包含SEQ ID NO:2(VHLTPVEKS)的合成HBS肽；

(b)将步骤(a)的标准溶液与胰蛋白酶一起温育；

(c)通过液相色谱法对经温育的标准溶液中的合成HBB肽和合成HBS肽与其它组分进行色谱分离；

(d)针对每份标准溶液通过质谱法分析经色谱分离的合成HBB肽和合成HBS肽；

(e)针对每份标准溶液确定所述合成HBB肽和合成HBS肽的质谱峰体积；以及

(f)生成标准曲线。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述系列的标准溶液包含：含有100:0的合成HBB/合成HBS比率的第一溶液，含有90:10的合成HBB/合成HBS比率的第二溶液，含有80:20的合成HBB/合成HBS比率的第三溶液，含有70:30的合成HBB/合成HBS比率的第四溶液，含有60:40的合成HBB/合成HBS比率的第五溶液，含有50:50的合成HBB/合成HBS比率的第六溶液，含有40:60的合成HBB/合成HBS比率的第七溶液，含有30:70的合成HBB/合成HBS比率的第八溶液，含有20:80的合成HBB/合成HBS比率的第九溶液，含有10:90的合成HBB/合成HBS比率的第十溶液，和含有0:100的合成HBB/合成HBS比率的第十一溶液。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述溶血产物样品获自来自于包含所述基因修饰的受试者的血浆样品。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述溶血产物样品获自来自于包含所述基因修饰的受试者的红细胞群。

6.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述红细胞分化自经基因修饰的造血干细胞或诱导性多能干细胞，其中已经处理了所述细胞以矫正编码血红蛋白的基因组序列中的镰状细胞突变。

7.一种确定包含多个经基因修饰的造血干细胞的造血干细胞群是否会有效减轻受试者中镰状细胞疾病的一种或多种症状的方法，所述经基因修饰的造血干细胞在编码血红蛋白的基因组序列上具有经矫正的镰状细胞突变，所述方法包括：

(a)使所述造血干细胞群的第一亚群分化成红细胞；

(b)保存所述造血干细胞群的第二亚群；

(c)由所述红细胞获得溶血产物样品；

(d)将所述溶血产物样品与胰蛋白酶一起温育；

(e)通过液相色谱法对经胰蛋白酶处理的样品中的HBB和HBS肽与其它组分进行色谱分离；

(f)通过质谱法分析经色谱分离的HBB和HBS肽；以及

(g)确定所述溶血产物样品中的HBB/HBS比率，其中约30％或更高的HBB/HBS比率指示所述保存的造血干细胞亚群在减轻所述受试者中镰状细胞疾病的一种或多种症状方面将是有效的。