[发明专利]获得有效用于疫苗接种或基因治疗的基于病毒载体的组合物的新方法

说明书

本发明涉及用于制备基于病毒载体的组合物的方法，其中存在于组合物中的基于病毒载体的颗粒具有多分散性指数(PDI)小于0.5的粒度分布，所述方法包括以下步骤：(a)提供复制缺陷病毒载体；(b)提供溶液，所述溶液包含至少一种糖和选自亲水性赋形剂和两亲性赋形剂的至少三种不同的赋形剂，其中所述赋形剂的特征在于极性、脂肪族、芳香族、带负电和/或带正电的官能团，并且其中所述溶液的特征进一步在于赋形剂‑糖的比率为至少1:2；和(c)将步骤(a)的所述复制缺陷病毒载体与步骤(b)的所述溶液混合。本发明还涉及可通过本发明的方法获得的基于病毒载体的组合物，以及本发明的基于病毒载体的组合物，其用作初免‑加强疫苗。

本发明涉及用于制备基于病毒载体的组合物的方法，其中存在于组合物中的基于病毒载体的颗粒具有多分散性指数(PDI)小于0.5的粒度分布，所述方法包括以下步骤：(a)提供复制缺陷病毒载体；(b)提供溶液，所述溶液包含至少一种糖和选自亲水性赋形剂和两亲性赋形剂的至少三种不同的赋形剂，其中所述赋形剂的特征在于极性、脂肪族、芳香族、带负电和/或带正电的官能团，并且其中所述溶液的特征进一步在于赋形剂-糖的比率为至少1:2；和(c)将步骤(a)的所述复制缺陷病毒载体与步骤(b)的所述溶液混合。本发明还涉及可通过本发明的方法获得的基于病毒载体的组合物，以及本发明的基于病毒载体的组合物，其用作初免-加强疫苗。

在本说明书中，引用了许多文件，包括专利申请和生产商手册。这些文件的公开内容以其整体援引加入本文，但不被认为与本发明的专利性有关。更具体地，所有参考文件援引加入，相同的程度如同明确地且单独地指出各单独文件援引加入。

复制缺陷重组病毒载体代表疫苗开发和基因治疗的快速发展领域。当打算用于疫苗接种时，病毒载体和病毒样颗粒(VLP)相比传统疫苗提供一系列优势。除了诱导特异的抗体应答外，它们还引发细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，其对控制细胞内病原体和癌症至关重要，是基于蛋白质的疫苗未观察到的特征[Rollier CS等人,2011]。许多病毒种已被评价为疫苗的重组载体，包括反转录病毒、慢病毒、痘苗病毒(例如，修饰的安卡拉痘苗病毒；MVA)、腺病毒、腺相关病毒、巨细胞病毒、仙台病毒、麻疹病毒和水疱性口炎病毒(VSV)。然而，迄今为止评价最广泛的载体是5型腺病毒和痘病毒家族的成员[Rollier CS等人,2011,Ura T等人,2014]。

与病毒载体相关的缺点，特别是在制备、储存和分配方面，是它们是高分子的复杂超分子集合体，其易于各种化学和物理降解途径[Vrdoljak A等人,2012]。因此，该领域的主要挑战是减少(避免)邻近病毒颗粒的交联和载体颗粒相互作用，这通常在生产、储存和应用的不同阶段通过各种机制在宽范围的浓度下引起。病毒载体在组合物中的不同形状和大小的颗粒团聚的这种固有趋向导致病毒颗粒的不均匀粒度分布和关联的多分散性增加。最终，这些作用导致治疗效果的显著丢失，甚至可能在注射部位产生不良反应，其最可能是由于所述颗粒团聚导致观察到的粘度增加。此外，病毒载体的聚集也被认为影响给药后的生物分布，并且与蛋白质药物类似，病毒载体的聚集可通过靶向载体至抗原呈递细胞而增加不期望的免疫原性，从而诱导或增强不期望的对表面蛋白或蛋白衣壳和转基因产品的免疫应答。由于高多分散性与高粘度相关，预期未显示出这样的不期望的多分散性的组合物也会导致更好的可灌注性和可注射性。因此，非常需要具有低多分散性并且在载体颗粒分布和功能效力之间具有更合适比率的改进的基于病毒载体的疫苗。