[发明专利]具有改善的比活性的乙酰乳酸脱羧酶变体

说明书

提供了包含具有更高比活性的乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)酶变体的组合物和方法。提供了组合物和方法，其中将所述ALDC变体与金属离子组合使用，以进一步增加稳定性和/或活性。

背景技术

二乙酰有时是含有例如麦芽汁或葡萄汁等物质的碳水化合物的发酵过程中不希望的副产物。二乙酰的形成是最不利的，因为它具有强烈和不愉快的气味，并且在啤酒的情况下，即使约0.10mg/升至0.15mg/升的少量的二乙酰对啤酒的风味和味道也将产生负面影响。在啤酒成熟期间，二乙酰由酵母细胞中的还原酶转化成乙偶姻。对于啤酒的风味和味道而言，相较于二乙酰，可以接受更高浓度的乙偶姻。

乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)也可以用作预防二乙酰形成的酶。在发酵期间，通过添加ALDC酶，可以将α-乙酰乳酸转化为乙偶姻。然而，在发酵条件下，尤其是在用低麦芽糖含量发酵麦芽汁的那些条件下，ALDC可能是不稳定的。

已经在国际专利申请号PCT/US16/33028和PCT/US16/33043中报道了与乙酰乳酸脱羧酶的用途有关的组合物和方法。

然而，存在鉴定具有改善的特性(例如改善的比活性)的ALDC变体的持续的需求。

发明内容

提供了具有改善的比活性的ALDC变体。可以将本发明改善的变体并入适合的方法、装置、和试剂盒。

在以下分别编号的段落中阐述了成分和方法的多个方面和实施例。

1.提供了一种具有乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)活性的重组多肽，所述重组多肽包含

(i)与SEQ ID NO：3的氨基酸序列至少80％的氨基酸同一性，并且其中参考SEQ IDNO：3中示出的序列的位置编号，所述多肽包含在位置62处的至少一个氨基酸取代，或

(ii)(i)的功能片段，所述功能片段具有的比活性高于或等于(a)的比活性。

2.根据段落1所述的重组多肽，所述重组多肽与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少90％氨基酸同一性。

3.根据段落2所述的重组多肽，其中所述氨基酸取代是T62A。

4.根据段落3所述的重组多肽，所述重组多肽具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列。

5.一种组合物，所述组合物包含根据段落1、段落2、段落3或段落4所述的重组多肽，和浓度为约1μM至约200mM的锌。

6.根据段落5所述的组合物，其中所述锌以约10μM至约150mM、或约20μM至约120mM、或约25μM至约100mM、或约25μM至约50mM、或约25μM至约20mM、或约25μM至约50μM、或约100μM至约20mM、或约250μM至约20mM、或约500μM至约20mM、或约1mM至约20mM、或约1mM至约10mM、或约1mM至约5mM的浓度存在。

7.根据段落5所述的组合物，其中锌与所述重组多肽的摩尔比为

(i)高于1；或

(ii)是2∶1或更高；或

(iii)是10∶1或更高；或

(iv)是20∶1或更高；或

(v)是30∶1或更高；或

(vi)是60∶1或更高。

8.根据段落5所述的组合物，其中将所述具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽用戊二醛处理。

9.根据段落8所述的组合物，其中按对应于约0.1克至约5克戊二醛/克具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽的浓度将所述具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽用戊二醛处理。