[发明专利]具有改善的比活性的乙酰乳酸脱羧酶变体

权利要求书

1.一种具有乙酰乳酸脱羧酶(ALDC)活性的重组多肽，所述重组多肽包含

(i)与SEQ ID NO：3的氨基酸序列至少80％的氨基酸同一性，并且其中参考SEQ ID NO：3中示出的序列的位置编号，所述多肽包含在位置62处的至少一个氨基酸取代，或

(ii)(i)的功能片段，所述功能片段具有的比活性高于或等于(a)的比活性。

2.根据权利要求1所述的重组多肽，所述重组多肽与SEQ ID NO：3的氨基酸序列具有至少90％氨基酸同一性。

3.根据权利要求2所述的重组多肽，其中所述氨基酸取代是T62A。

4.根据权利要求3所述的重组多肽，所述重组多肽具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列。

5.一种组合物，所述组合物包含根据权利要求1、权利要求2、权利要求3或权利要求4所述的重组多肽，和浓度为约1μM至约200mM的锌。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述锌以约10μM至约150mM、或约20μM至约120mM、或约25μM至约100mM、或约25μM至约50mM、或约25μM至约20mM、或约25μM至约50μM、或约100μM至约20mM、或约250μM至约20mM、或约500μM至约20mM、或约1mM至约20mM、或约1mM至约10mM、或约1mM至约5mM的浓度存在。

7.根据权利要求5所述的组合物，其中锌与所述重组多肽的摩尔比为

(i)高于1；或

(ii)是2∶1或更高；或

(iii)是10∶1或更高；或

(iv)是20∶1或更高；或

(v)是30∶1或更高；或

(vi)是60：1或更高。

8.根据权利要求5所述的组合物，其中将所述具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽用戊二醛处理。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中按对应于约0.1克至约5克戊二醛/克具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽的浓度将所述具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽用戊二醛处理。

10.根据任一前述权利要求所述的组合物，其中所述具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽的活性是在950至3500单位/mg蛋白质的范围内。

11.根据任一前述权利要求所述的组合物，其进一步包含选自由以下各项组成的组的至少一种另外的酶或酶衍生物：乙酰乳酸还原异构酶、乙酰乳酸异构酶、淀粉酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、纤维素酶、葡聚糖酶、支链淀粉酶、异淀粉酶、内切葡聚糖酶和相关β-葡聚糖水解辅助酶、木聚糖酶、木聚糖酶辅助酶(例如，阿拉伯呋喃糖苷酶、阿魏酸酯酶和木聚糖乙酰酯酶)和蛋白酶。

12.根据任一前述权利要求所述的组合物，其中所述具有乙酰乳酸脱羧酶活性的重组多肽衍生自乙酰乳酸脱羧酶，该乙酰乳酸脱羧酶来源于短芽孢杆菌(Bacillus brevis)或地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。

13.根据任一前述权利要求所述的组合物在啤酒和/或葡萄酒和/或苹果酒和/或梨酒和/或日本清酒发酵中的用途。

14.一种用于增加根据权利要求1或权利要求2所述的重组多肽的活性和/或稳定性的方法，其中所述方法包括将锌添加到包含所述重组多肽的组合物中的步骤，以使所述锌以约1μM至约200mM的浓度存在于所述组合物中。

15.根据权利要求14所述的方法，其中以1μM至约5mM的浓度添加所述锌。