[发明专利]用于失活FUT8基因的复合物和方法

说明书

提供了一种利用TALEN技术在真核细胞中产生并测序筛选靶基因的双等位基因敲除的方法，以及包含切割位点为ATCTGGCCACTGATG的TALEN质粒对的双链多核苷酸。

相关申请的交叉引用

本发明要求2016年12月21日递交的标题为“用于失活FUT8基因的复合物和方法”的中国发明专利申请201611185840.5的优先权。

技术领域

本发明涉及基因工程、细胞培养以及蛋白质生产领域，具体涉及用于失活Fut8基因的复合物和方法。

背景技术

抗体激活免疫系统破坏攻击细胞存在两种机制：补体依赖性细胞毒性(CDC)和抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)。ADCC是主要由针对抗体包被的靶的天然杀伤(NK)细胞产生的免疫应答。参见，Lewis GD等(1993)，Differential responses of human tumor celllines to anti-p185HER2monoclonal antibodies，Cancer Immunol Immunother，37：255-63。在ADCC中，NK细胞主要经由与NK细胞FcγRIII受体的相互作用识别抗体恒定(Fc)区。然后NK细胞沉积穿孔素和颗粒酶等细胞毒物质于靶细胞表面，进而诱导细胞裂解和凋亡。Fc-FcγRIII相互作用对Fc糖基化极度敏感。非糖基化免疫球蛋白不能结合Fc受体。参见，Leatherbarrow RJ等(1985)，Effector functions of a monoclonal aglyco-sylatedmouse IgG2a:binding and activation of complement component CI and interactionwith human monocyte Fc receptor，Mol Immunol，22：407-15；Walker MR等(1989)，Aglycosylation of human IgG1and IgG3monoclonal antibodies can eliminaterecognition by human cells expressing Fc gamma RI and/or Fc gamma RIIreceptors，Biochem J，259：347-53；Leader KA等(1991)，Functional interactions ofaglycosylated monoclonal anti-D with Fc gamma RI+and Fc gamma RIII+cells，Immunology，72：481-5。另外，附着于Fc区Asn297的碳水化合物链的岩藻糖基化抑制抗体Fc区与FcγRIII的结合，并且在体外降低ADCC活性。参见，Shields RL等(2002)，Lack offucose on human IgG1N-linked oligosaccharide improves binding to humanFcgamma RIII and antibody-dependent cellular toxicity，J Biol Chem，277：26733-40；Shinkawa R等(2003)，The absence of fucose but not the presence of galactoseor bisecting N-acetylglucosamine of human IgG1complex-type oligosaccharidesshows the critical role of enhancing antibody-dependent cellularcytotoxicity，J Biol Chem，278：3466-73；Niwa R(2004)，Defucosylated chimericanti-CC chemokine receptor 4IgG1with enhanced antibody-dependent cellularcytotoxicity shows potent therapeutic activity to T-cell leukemia andlymphoma，Cancer Res，64：2127-33。