[发明专利]用于失活FUT8基因的复合物和方法有效
| 申请号： | 201780068144.2 | 申请日： | 2017-12-21 |
| 公开（公告）号： | CN109963946B | 公开（公告）日： | 2023-04-11 |
| 发明（设计）人： | 吴海祥;秦民民;林小花;苏艳芳;吕亚楠;崔笑添;周桢昊;宋利平;龙凯 | 申请（专利权）人： | 上海津曼特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N5/10;C07K16/00;A61K39/395;A61P35/00 |
| 代理公司： | 中国贸促会专利商标事务所有限公司 11038 | 代理人： | 张小勇 |
| 地址： | 201210 上海市浦东新区中国（*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 fut8 基因 复合物 方法 | ||
1.在真核细胞中产生靶基因的双等位基因敲除的方法，其包括：
向细胞提供TALEN质粒对，所述TALEN质粒对的识别序列用于识别靶基因；
使细胞表达TALEN蛋白，所述TALEN蛋白识别靶基因并切割靶基因；
测序筛选靶基因发生双等位基因敲除的真核细胞；
其中切割位点位于
其中真核细胞是CHO细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中CHO细胞是CHO-K1、CHO-S、CHOK1SV、DG44或DXB11细胞。
3.哺乳动物细胞，其被使用如权利要求1-2任一项所述的方法进行靶基因的双等位基因敲除，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。
4.制备目标重组蛋白的方法，所述方法包括：
向真核细胞提供TALEN质粒对，所述TALEN质粒对的识别序列用于识别靶基因；
使细胞表达TALEN蛋白，所述TALEN蛋白识别靶基因并切割靶基因；
测序筛选靶基因发生双等位基因敲除的细胞；
使细胞表达目标重组蛋白；
其中切割位点位于
其中真核细胞是CHO细胞。
5.根据权利要求4所述的方法，其中真核细胞是CHO-K1、CHO-S、CHOK1SV、DG44或DXB11细胞。
6.双链多核苷酸，其包含：
TALEN质粒对，其识别序列用于识别靶基因，相应的切割位点为atctggccactgatg（SEQID NO. 16），所述TALEN质粒对的识别序列为L2R2，L2序列为：ggataaaaaaagagtg，并且R2序列为：cctttaacaaagaaggg。
7.TALEN技术用于在真核细胞中产生靶基因的双等位基因敲除的用途，其中测序筛选靶基因发生双等位基因敲除的真核细胞；
其中切割位点位于
其中真核细胞是CHO细胞。
8.根据权利要求7所述的用途，其中真核细胞是CHO-K1、CHO-S、CHOK1SV、DG44或DXB11细胞。
9.根据权利要求1-2和4-5任一项所述的方法或权利要求7-8任一项所述的用途，其中测序为DNA直接测序。
10.根据权利要求1-2和4-5任一项所述的方法或权利要求7-8任一项所述的用途，其中筛选包括基于LCA的表型筛选和/或DNA直接测序筛选。
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