[发明专利]分化多能细胞的方法在审
| 申请号： | 201780063703.0 | 申请日： | 2017-08-16 |
| 公开（公告）号： | CN109844102A | 公开（公告）日： | 2019-06-04 |
| 发明（设计）人： | C·W·麦克马洪;L·E·利特尔;W·B·王;N·A·埃利奥特 | 申请（专利权）人： | 富士胶片细胞动力股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0793 | 分类号： | C12N5/0793 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 余颖;陈扬扬 |
| 地址： | 美国威*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 多能细胞 神经元 抑制剂 分化 骨形态发生蛋白 中脑多巴胺能 信号转导 | ||
1.一种用于制备包含人细胞的细胞组合物的体外方法，所述人细胞表达叉头框蛋白A2(FOXA2)和LIM同源框转录因子1(LMX1)(FOXA2+/LMX1+细胞)，所述方法包括在下述信号转导调节剂存在的情况下培养人多能细胞：
(a)小母抗Dpp(SMAD)信号转导的单一抑制剂，
(b)音猬因子(SHH)信号转导的至少一种激活剂，和
(c)无翼(Wnt)信号转导的至少一种激活剂；
并在存在所述调节剂的情况下培养所述细胞一段时间，该段时间足以提供包含所述FOXA2+/LMX1+细胞的细胞组合物。
2.如权利要求1所述的方法，其中，所述SMAD信号转导的抑制剂是BMP抑制剂。
3.如权利要求2所述的方法，其中，所述BMP抑制剂是LDN-193189，背吗啡，DMH-1或头蛋白。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述BMP抑制剂是LDN-193189。
5.如权利要求4所述的方法，其中，所述LDN-193189以约0.2μM至约4μM的浓度存在。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述LDN-193189以约1μM至约3μM的浓度存在。
7.如权利要求1所述的方法，其中所述SMAD信号转导抑制剂是TGFβ抑制剂。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述TGFβ抑制剂是SB431542。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，在培养第1-15、1-16或1-17天用所述SMAD的抑制剂培养多能细胞。
10.如权利要求9所述的方法，其中，在培养第1-17天培养用所述SMAD的抑制剂培养多能细胞。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，基本上连续地或每天用所述SMAD的抑制剂培养多能细胞15、16或17天。
12.如权利要求11所述的方法，其中，基本上连续地或每天用所述SMAD的抑制剂培养多能细胞17天。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中，所述SMAD的抑制剂以约50-2000或50-500nM的浓度存在。
14.如权利要求13所述的方法，其中，所述SMAD的抑制剂以约180-240nM的浓度存在。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括将所述多能细胞与MEK抑制剂接触。
16.如权利要求15所述的方法，其中，所述MEK抑制剂是PD0325901。
17.如权利要求16所述的方法，其中，所述PD0325901以约0.25-2.5μM的浓度存在。
18.如权利要求14-17中任一项所述的方法，其中，与所述SMAD信号转导的抑制剂的接触开始后，所述MEK抑制剂与所述多能细胞接触约1-3天，或在与所述SMAD信号转导的抑制剂接触开始后第1-3、2-4、3-5天或第1、2、3、4或5天接触。
19.如权利要求18所述的方法，其中，与所述SMAD信号转导的抑制剂的接触开始后，所述MEK抑制剂与所述多能细胞接触约24至约48小时。
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