[发明专利]用于降低治疗性蛋白的异质性的连续方法

说明书

本公开涉及能够连续生产具有降低的异质性的治疗性蛋白的生物制造方法。本文公开的生物制造方法利用多柱层析系统，该多柱层析系统进行降低治疗性蛋白的异质性、捕获治疗性蛋白和灭活病毒、纯化治疗性蛋白和精细纯化(polishing)纯化的治疗性蛋白的单元操作。本文公开的方法可以通过减少治疗性蛋白的碱性亚型的比例来降低治疗性蛋白的异质性。

技术领域

本公开涉及治疗性蛋白的生物制造技术领域。特别地，本公开涉及用于制造具有降低的异质性的治疗性蛋白的连续方法。

背景技术

背景描述包括可能对理解本发明有用的信息。这并不是承认本文提供的任何信息是现有技术或者与本发明要求保护的发明相关，或者并不是承认具体或隐含地引用的任何出版物是现有技术。

治疗性蛋白的重要性的确认已经引发了生物制药行业的新革命。然而，治疗性蛋白的生产通常观察到其带电荷的亚型，其在很大程度上干扰了获得产品的高产率和高质量所需的分离和纯化过程。

羧肽酶通常用于制备同质形式的治疗性蛋白，例如单克隆抗体，因为它催化C-末端肽键的水解。羧肽酶B是一种优先作用于碱性氨基酸(例如精氨酸和赖氨酸)的羧肽酶。

在现有技术中已经公开了多种方法以降低治疗性蛋白中的异质性的量。例如，US5126250公开了通过在纯化之前将大多数异质抗体转化为一种基本上同质的形式来降低来自抗体生成细胞的分泌抗体的异质性的方法。

WO20120147053公开了降低通过细胞培养获得的抗体的异质性的方法。

US9062337公开了利用肽酰甘氨酸α酰胺化单加氧酶(peptidylglycine alphaamidating monooxigenase)来截短肽的C末端残基。

多种现有技术文献还公开了用于纯化和生产治疗性蛋白的酶的固定化。Chemuru等，Biopolymers 2014年3月；102(2):206-221公开了使用固定在琼脂糖珠上的羧肽酶B去除Aβ肽的lys残基。

Kudryavtseva等，Pharm Chem J(1995)29:70公开了将胰蛋白酶和羧肽酶B固定在改性二氧化硅上以将胰岛素原转化为胰岛素。Yasuhara和Ohashi，Appl BiochemBiotechnol(1994)44:151公开了将羧基肽酶原B(pocarboxypeptidase B)固定在琼脂糖凝胶上以除去肽的C末端残基。

US9657056公开了用于制造治疗性蛋白药物物质的整合且连续的方法，其中来自灌注生物反应器的液体培养基被转移到MCCS1上以在四个柱中的前三个柱上捕获，并且来自这些柱的洗脱物在第四个柱上上样并孵育用于病毒灭活。将含有重组治疗性蛋白的MCCS1的洗脱物连续进样到第二个多柱层析系统(MCCS2)中；并且使用MCCS2纯化和精细纯化(polishing)重组治疗性蛋白。

去除来自C-末端残基的异质性通常在补料分批培养中通过将羧肽酶直接添加到生物反应器的培养基中进行或在层析步骤后立即进行。然而，添加酶需要在孵育时间、温度、pH等方面的大量优化步骤。此外，酶的高成本导致总体工艺成本的增加。

由于如稳态操作、小设备尺寸、高容积生产率、流线型的工艺流程、低循环时间和降低的资金成本等各种优点，连续生物处理最近获得了大量关注。

尽管在现有技术中已经公开了许多用于降低治疗性蛋白的异质性的方法，但是没有一个描述用于生产具有降低的异质性的治疗性蛋白的连续方法。现有技术也没有提供能够在纯化前降低蛋白的异质性的方法。

发明内容

本发明满足了现有需求以及其他需求，并且大体上克服了现有技术中发现的缺陷。