[发明专利]用于降低治疗性蛋白的异质性的连续方法

权利要求书

1.一种用于降低治疗性蛋白的异质性的连续方法，所述方法包括在单个多柱层析系统中减少所述治疗性蛋白的一种或多种碱性亚型。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述单个多柱层析系统包括至少两个层析柱。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述单个多柱层析系统包括含有固定在琼脂糖凝胶上的羧肽酶B的柱。

4.一种用于降低治疗性蛋白的异质性的连续方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供包括第一柱、第二柱、第三柱和第四柱的多柱层析系统；

(b)将包含治疗性蛋白的细胞培养收获物进样到所述第一柱中，从而降低所述治疗性蛋白的异质性；其中所述第一柱包含固定在琼脂糖凝胶上的羧肽酶B，

(c)将来自所述第一柱的流通物进样到所述第二柱中，从而捕获所述第一柱的流通物中的所述治疗性蛋白；

(d)将来自所述第二柱的包含所述治疗性蛋白的洗脱物进样到所述第三柱中以纯化所述治疗性蛋白；以及

(e)将来自所述第三柱的包含所述治疗性蛋白的流通物进样到所述第四柱中以精细纯化所述治疗性蛋白。

5.根据权利要求4所述的方法，进一步包括收集来自所述第二柱的包含所述治疗性蛋白的洗脱物，并将包含所述治疗性蛋白的洗脱物保持在低pH下用于病毒灭活。

6.根据权利要求4所述的方法，进一步包括在进样到所述第三柱之前，对来自所述第二柱的包含所述治疗性蛋白的洗脱物进行pH和电导率调节。

7.根据权利要求4所述的方法，进一步包括在进样到所述第四柱之前，对来自所述第三柱的包含所述治疗性蛋白的流通物进行pH和电导率调节。

8.根据权利要求4所述的方法，其中所述第一柱、所述第二柱、所述第三柱和所述第四柱按串联依次连接或并联连接。

9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一柱通过减少所述治疗性蛋白的碱性亚型的比例来降低所述治疗性蛋白的异质性。

10.根据权利要求4所述的方法，其中所述第二柱是亲和层析柱。

11.根据权利要求4所述的方法，其中所述第三柱和所述第四柱中的每一个选自由阴离子交换层析柱、阳离子交换层析柱、疏水相互作用层析柱和多峰层析柱组成的组。

12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述治疗性蛋白选自抗体、抗体片段、单克隆抗体、酶、工程化蛋白、免疫原性蛋白、蛋白片段、免疫球蛋白或其任意组合。