[发明专利]重组蛋白的纯化方法

说明书

本发明公开了一种重组蛋白的纯化方法，其为从以不溶体的形式在细胞内表达目标重组蛋白的重组细胞中纯化所述重组蛋白的方法，其特征在于，在添加或未添加无机盐的第一非质子性极性溶剂中在来源于宿主细胞的蛋白质溶解、但所述重组蛋白不溶解的条件下对所述重组细胞进行处理，除去第一可溶性级分后，将所得到的第一不溶性级分在添加无机盐的第二非质子性极性溶剂中在所述重组蛋白溶解的条件下进行处理。

技术领域

本发明涉及从表达重组蛋白的重组细胞中纯化该重组蛋白的方法。

背景技术

利用基因重组宿主细胞能够以工业规模生产目标蛋白质。也报道了很多对利用重组细胞生产的重组蛋白进行单离、纯化的方法。

作为单离不溶性的目标蛋白质的方法，报道了从重组细胞的悬浮液中利用氢氧化钠等金属氢氧化物的方法(专利文献1)、以及利用甲酸、丙酸等有机酸的方法(专利文献2)等。但是，在利用这些方法单离不溶性的目标蛋白质的情况下，难以除去与目标蛋白质一同存在的杂质，因此存在单离出的目标蛋白质的纯度不高的问题。另外，在使用有机酸的方法的情况下，对酸不具有耐性的蛋白质容易被分解，因此存在能够单离的蛋白质有限的问题。

作为能够除去与目标蛋白质一同存在的杂质、不使用有机酸的方法，报道了下述方法等：溶解于二甲亚砜等非质子性极性溶剂中，使用水等溶剂将杂质除去，对目标蛋白质进行纯化(专利文献3)。利用该方法，能够将目标蛋白质纯化至约70％，但存在目标蛋白质限定于亲水指数(HI)为0以下的亲水性重组蛋白的问题。另外，根据蛋白质的不同，还有可能由于为了除去杂质而添加的水等水系溶剂的影响而发生凝胶化。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2013-523665号公报

专利文献2：日本特表2004-503204号公报

专利文献3：国际公开第2014/103847号

发明内容

发明所要解决的问题

在工业规模的生产中，依然期望简便地高纯度地对目标重组蛋白进行纯化的方法。因此，本发明的目的在于提供从以不溶体的形式在细胞内表达目标重组蛋白的重组细胞中简便地高纯度地纯化该重组蛋白的方法。

用于解决问题的方法

本发明人进行了深入研究，结果发现，通过使用非质子性极性溶剂，在来源于宿主细胞的蛋白质溶解、但目标重组蛋白不溶解的条件下对重组细胞进行处理，在使目标重组蛋白溶解之前将来源于宿主细胞的蛋白质除去，由此能够在不添加水等水系溶剂的情况下简便地高纯度地纯化目标重组蛋白，从而完成了本发明。

即，本发明涉及例如以下的各发明。

[1]一种重组蛋白的纯化方法，其为从以不溶体的形式在细胞内表达目标重组蛋白的重组细胞中纯化上述重组蛋白的方法，其特征在于，

在添加或未添加无机盐的第一非质子性极性溶剂中在来源于宿主细胞的蛋白质溶解、但上述重组蛋白不溶解的条件下对上述重组细胞进行处理，除去第一可溶性级分后，将所得到的第一不溶性级分在添加无机盐的第二非质子性极性溶剂中在上述重组蛋白溶解的条件下进行处理。

[2]如[1]所述的重组蛋白的纯化方法，其中，进一步包括如下步骤：在添加无机盐的第二非质子性极性溶剂中在上述重组蛋白溶解的条件下进行处理之后除去第二不溶性级分，得到包含重组蛋白的第二可溶性级分。

[3]如[2]所述的重组蛋白的纯化方法，其中，进一步包括如下步骤：使用上述重组蛋白的不良溶剂对除去第二不溶性级分后得到的第二可溶性级分进行处理，使上述重组蛋白凝集，以凝集体的形式得到纯化后的重组蛋白。

[4]一种重组蛋白的纯化方法，其包括以下(A)～(D)的步骤：