[发明专利]重组蛋白的纯化方法

权利要求书

1.一种重组蛋白的纯化方法，其为从以不溶体的形式在细胞内表达目标重组蛋白的重组细胞中纯化所述重组蛋白的方法，其特征在于，

在添加或未添加无机盐的第一非质子性极性溶剂中在来源于宿主细胞的蛋白质溶解、但所述重组蛋白不溶解的条件下对所述重组细胞进行处理，除去第一可溶性级分后，将所得到的第一不溶性级分在添加无机盐的第二非质子性极性溶剂中在所述重组蛋白溶解的条件下进行处理。

2.如权利要求1所述的重组蛋白的纯化方法，其中，进一步包括如下步骤：在添加无机盐的第二非质子性极性溶剂中在所述重组蛋白溶解的条件下进行处理之后除去第二不溶性级分，得到包含重组蛋白的第二可溶性级分。

3.如权利要求2所述的重组蛋白的纯化方法，其中，进一步包括如下步骤：使用所述重组蛋白的不良溶剂对除去第二不溶性级分后得到的第二可溶性级分进行处理，使所述重组蛋白凝集，以凝集体的形式得到纯化后的重组蛋白。

4.一种重组蛋白的纯化方法，其包括以下(A)～(D)的步骤：

(A)对于以不溶体的形式在细胞内表达目标重组蛋白的重组细胞，使用添加或未添加无机盐的第一非质子性极性溶剂，在来源于宿主细胞的蛋白质溶解、但所述重组蛋白不溶解的条件下进行处理的步骤；

(B)除去第一可溶性级分，回收包含所述重组蛋白的第一不溶性级分的步骤；

(C)使用添加无机盐的第二非质子性极性溶剂，在所述重组蛋白溶解的条件下对回收的第一不溶性级分进行处理的步骤；

(D)除去第二不溶性级分，得到包含所述重组蛋白的第二可溶性级分的步骤。

5.如权利要求4所述的重组蛋白的纯化方法，其中，进一步包括：

(E)使用所述重组蛋白的不良溶剂对第二可溶性级分进行处理，使所述重组蛋白凝集，以凝集体的形式回收纯化后的重组蛋白的步骤。

6.如权利要求1～5中任一项所述的重组蛋白的纯化方法，其特征在于，所述条件为温度条件。

7.如权利要求1～6中任一项所述的重组蛋白的纯化方法，其中，所述第一非质子性极性溶剂或第二非质子性极性溶剂的偶极矩为3.0D以上。

8.如权利要求1～7中任一项所述的重组蛋白的纯化方法，其中，所述无机盐选自由碱金属卤化物、碱土金属卤化物、碱土金属硝酸盐和硫氰酸盐组成的组。

9.如权利要求1～8中任一项所述的重组蛋白的纯化方法，其中，所述重组蛋白为结构蛋白质。

10.如权利要求9所述的纯化方法，其中，所述结构蛋白质来源于选自由胶原蛋白、弹性蛋白、节肢弹性蛋白、蚕丝和蛛丝组成的组中的蛋白质。

11.一种人造多肽纤维的制造方法，其包括以下(A)～(D)和(F)的步骤：

(A)对于以不溶体的形式在细胞内表达目标重组蛋白的重组细胞，使用添加或未添加无机盐的第一非质子性极性溶剂，在来源于宿主细胞的蛋白质溶解、但所述重组蛋白不溶解的条件下进行处理的步骤；

(B)除去第一可溶性级分，回收包含所述重组蛋白的第一不溶性级分的步骤；

(C)使用添加无机盐的第二非质子性极性溶剂，在所述重组蛋白溶解的条件下对回收的第一不溶性级分进行处理的步骤；

(D)除去第二不溶性级分，得到包含所述重组蛋白的第二可溶性级分的步骤；

(F)将第二可溶性级分以丝状液体的形式施加至凝固液中，使所述重组蛋白凝固成丝状并回收，由此得到未拉伸丝的步骤。

12.一种多肽膜的制造方法，其包括以下(A)～(D)和(G)的步骤：

(A)对于以不溶体的形式在细胞内表达目标重组蛋白的重组细胞，使用添加或未添加无机盐的第一非质子性极性溶剂，在来源于宿主细胞的蛋白质溶解、但所述重组蛋白不溶解的条件下进行处理的步骤；

(B)除去第一可溶性级分，回收包含所述重组蛋白的第一不溶性级分的步骤；

(C)使用添加无机盐的第二非质子性极性溶剂，在所述重组蛋白溶解的条件下对回收的第一不溶性级分进行处理的步骤；

(D)除去第二不溶性级分，得到包含所述重组蛋白的第二可溶性级分的步骤；

(G)使用第二可溶性级分在对第二非质子性极性溶剂具有耐性的平板上形成规定厚度的涂膜，从所述涂膜中除去第二非质子性极性溶剂，由此得到多肽膜的步骤。