[发明专利]二磷酸甲羟戊酸脱羧酶变异体、和利用了该变异体的烯烃化合物的制造方法有效
| 申请号： | 201780057299.6 | 申请日： | 2017-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN109715815B | 公开（公告）日： | 2022-11-29 |
| 发明（设计）人： | 折下凉子;白井智量;高桥和弘;日座操;田边祐介 | 申请（专利权）人： | 国立研究开发法人理化学研究所;日本瑞翁株式会社;横滨橡胶株式会社 |
| 主分类号： | C12P5/02 | 分类号： | C12P5/02;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N9/88;C12N15/09;C12P21/02 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人： | 曾祯;段承恩 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 二磷酸 甲羟戊酸 脱羧酶 异体 利用 烯烃 化合物 制造 方法 | ||
1.异戊二烯或异丁烯的制造方法，包括：在序列号2所记载的氨基酸序列的152位的甘氨酸变异成半胱氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶存在下，使3-羟基-3-甲基戊-4-烯酸或β-羟基异戊酸与ATP反应的工序。
2.异戊二烯或异丁烯的制造方法，包括：将导入了以下DNA或包含该DNA的载体的宿主细胞进行培养，采集该宿主细胞和/或其培养物中由3-羟基-3-甲基戊-4-烯酸或β-羟基异戊酸生成的异戊二烯或异丁烯的工序，上述DNA编码序列号2所记载的氨基酸序列的152位的甘氨酸变异成半胱氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶。
3.根据权利要求1或2所述的制造方法，上述二磷酸甲羟戊酸脱羧酶是进一步序列号2所记载的氨基酸序列的74位的精氨酸变异成组氨酸、且序列号2所记载的氨基酸序列的209位的苏氨酸变异成精氨酸的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶。
4.生成异戊二烯或异丁烯的催化活性提高了的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶的制造方法，该制造方法包括：在二磷酸甲羟戊酸脱羧酶中，使序列号2所记载的氨基酸序列的152位的甘氨酸变异成半胱氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸的工序。
5.根据权利要求4所述的制造方法，进一步包括：在上述二磷酸甲羟戊酸脱羧酶中，使序列号2所记载的氨基酸序列的74位的精氨酸变异成组氨酸、且使序列号2所记载的氨基酸序列的209位的苏氨酸变异成精氨酸的工序。
6.二磷酸甲羟戊酸脱羧酶，由在序列号2所记载的氨基酸序列中152位的甘氨酸变异成半胱氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸的氨基酸序列组成。
7.二磷酸甲羟戊酸脱羧酶，由在序列号2所记载的氨基酸序列中152位的甘氨酸变异成半胱氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸、74位的精氨酸变异成组氨酸、且209位的苏氨酸变异成精氨酸的氨基酸序列组成。
8.DNA，编码权利要求6或7所述的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶。
9.载体，包含权利要求8所述的DNA。
10.宿主细胞，其中，导入了权利要求8所述的DNA或包含该DNA的载体。
11.二磷酸甲羟戊酸脱羧酶变异体的制造方法，包括：培养权利要求10所述的宿主细胞，采集该宿主细胞所表达的蛋白质的工序。
12.用于使3-羟基-3-甲基戊-4-烯酸或β-羟基异戊酸与ATP反应、从而促进异戊二烯或异丁烯的生成的制剂，包含权利要求6或7所述的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶、编码该二磷酸甲羟戊酸脱羧酶的DNA或插入了该DNA的载体。
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