[发明专利]用于产生双链梭菌神经毒素的方法

权利要求书

1.用于产生双链梭菌神经毒素的方法，其包括在异源宿主细胞中分别表达编码梭菌神经毒素轻链的第一基因和编码梭菌神经毒素重链的第二基因，其中所述第一和第二基因在所述宿主细胞的氧化环境中表达。

2.权利要求1的方法，其中所述宿主细胞是原核细胞。

3.权利要求2的方法，其中所述氧化环境是所述宿主原核细胞的细胞质。

4.权利要求2或3的方法，其中所述原核细胞是这样的原核细胞，其中与其他方面相同的野生型细胞相比在细胞质中过量表达至少一个涉及二硫键形成的基因，和/或与其他方面相同的野生型细胞相比抑制至少一个涉及二硫键还原的基因。

5.权利要求4的方法，其中所述原核细胞是来自选自AD494、BL21trxB、Origami、Rosetta-gami和Shuffle菌株的菌株的大肠杆菌细胞。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素轻链选自BoNT A型、B型、C型、D型、E型、F型或G型或TeNT轻链，且其中所述梭菌神经毒素重链选自BoNT A型、B型、C型、D型、E型、F型或G型或TeNT重链。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素轻链和所述梭菌神经毒素重链来自同一BoNT血清型或亚型。

8.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述梭菌神经毒素轻链和所述梭菌神经毒素重链来自不同BoNT血清型或亚型。

9.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述编码梭菌神经毒素轻链的第一基因和所述编码梭菌神经毒素重链的第二基因存在于同一载体上。

10.权利要求1至8中任一项的方法，其中所述编码梭菌神经毒素轻链的第一基因和所述编码梭菌神经毒素重链的第二基因存在于不同载体上。

11.权利要求1至10中任一项的方法，其进一步包括从所述宿主细胞回收所述双链梭菌神经毒素的步骤。

12.细胞，其包含编码梭菌神经毒素轻链的第一基因和编码梭菌神经毒素重链的第二基因，其中所述第一和第二基因在所述细胞的氧化环境中表达。

13.试剂盒，其包含：

a.包含氧化环境的细胞；

b.编码梭菌神经毒素轻链的第一基因；和

c.编码梭菌神经毒素重链的第二基因；

其中所述第一和第二基因适合用于在所述细胞的所述氧化环境中分别表达梭菌神经毒素轻链和重链。

14.双链梭菌神经毒素，其通过权利要求1至11中任一项的方法获得。

15.药物组合物，其包含权利要求14的双链梭菌神经毒素。

16.具有氧化性细胞质的宿主细胞的用途，用于产生双链梭菌神经毒素，其中所述宿主细胞包含编码梭菌神经毒素轻链的第一基因和编码梭菌神经毒素重链的第二基因，其中所述第一和第二基因在所述宿主细胞的氧化性细胞质中表达。