[发明专利]估计细胞群体

说明书

一种用于帮助诊断患者/受试者的败血症或重度感染的免疫测定，所述测定包括以下步骤：(i)任选地，使来自所述患者的包含嗜中性白细胞的测试样品与使嗜中性白细胞渗透化或溶解的试剂接触；(ii)与(i)同时或依序，使所述样品与特异性结合所述样品中的CD64并形成CD64‑结合剂复合物a的结合剂接触；(iii)与(i)和/或(ii)同时或依序，使所述样品与特异性结合所述样品中的嗜中性白细胞数目标志物(NNM)并形成嗜中性白细胞标志物‑结合剂复合物b的第二结合剂接触；(iv)采用复合物a和复合物b的量来确定所述样品中CD46的相对水平和NNM的相对水平。

技术领域

本说明书的领域广泛来说涉及诊断学以及估计细胞生物群体的生物标志物表达水平。更具体来说，提供用于鉴定或监测包括新生儿受试者在内的受试者中的嗜中性白细胞活化、在嗜中性白细胞活化之后的病理生理性病症，以及特别是败血症或重度感染或发展出败血症或重度感染的风险的测定和试剂盒。本发明测定可以广泛范围的免疫测定形式加以应用，并且被开发来用于基于算法的诊断测定，所述诊断测定的范围是从快速床旁测定和装置至采用硬件和软件来输入和处理数据(包括通过算法来评定改变的生物标志物水平的统计显著性)以及制定能够与病理学平台系统整合的输出数据的更数据丰富的应用。

背景技术

本说明书中的参考文献的文献目录细节也列于说明书的末尾。

在本说明书中对任何先前技术的提及都并非而且不应视为承认或任何形式暗示该先前技术形成任何国家的公知常识的一部分。

各种技术在研究、分析、开发中以及在临床上用于检测目标细胞。手动或自动化技术可用于在容许评估样品中的细胞数目的特别设计腔室中对细胞进行计数。细胞可用特定染色剂染色以区分细胞类型。组织化学技术可应用于进一步区分样品中的细胞。细胞通过增殖或产生细胞因子来对特定抗原起应答、结合其它细胞、吞噬其它细胞或由于趋化性而移动的能力也可为诊断性的。细胞表面标志物尤其可用于区分细胞类型以及评估样品中特定细胞的数目和样品中此类细胞的生物状态变化。许多技术使用抗体来检测标志物的存在。

流式细胞计量术是一种用于对细胞进行鉴定和计数的强有力工具。流式细胞仪对连续穿过激光束的单个细胞进行检测和计数。通过检查大量细胞，流式细胞计量术可给出关于携带不同分子的细胞的百分比的定量数据，所述分子为诸如表征B细胞的表面免疫球蛋白、称为CD3的T细胞受体相关分子、以及区分主要T细胞亚群的CD4和CD8共受体蛋白质。将混合群体内的单个细胞用被荧光染料标记的特定抗体加以标签化，或例如依次用特定抗体和经标记抗免疫球蛋白抗体加以标签化。接着迫使经标记细胞的悬浮混合物穿过孔口，从而产生含有以间隔单独分隔的细胞的精细液流。当各细胞穿过激光光束时，各细胞使激光散射，并且结合于细胞的任何染料分子都将被激发并将发出荧光。灵敏光电倍增管检测给出关于细胞的尺寸和颗粒度的信息的散射光与给出关于经标记抗体的结合以及因此关于由各细胞进行的细胞表面蛋白质表达的信息的荧光发射两者。如果使用两种或更多种各自偶联于不同荧光染料的抗体，那么数据可以二维散点图形式或以等高线图形式显示，其中将一种经染料标记抗体的荧光相对于第二经染料标记抗体的荧光进行绘图，结果是用一种抗体标记的细胞群体可基于它与第二抗体的反应性来进一步细分。

免疫测定是利用抗体-抗原反应或其它结合相互作用的特异性、强度和多样性来分析样品以及检测或定量其中特定组分的测定的另一尤其可用的形式。广泛范围的免疫测定技术是可用的，诸如Wild D.“The Immunoassay Handbook”Nature Publishing Group,第4版,2013中所述的那些免疫测定技术以及后续革新。

侧流测定，以及更新近地，非侧流测定和微流体测定提供用于生物测定的可用设置。此类测定可为定性的、定量的或半定量的。在微流体装置中，使小体积的液体移动穿过在例如芯片或盒体中产生的微通道。广泛范围的检测试剂是可用的，包括金属纳米粒子、有色物质或发光物质。生物缀合金属纳米粒子的共振增强吸收(REA)提供快速处理时间和其它优势。这些装置已与条型码技术组合来鉴定所测试的患者和分析物。本公开涵盖用于评估输入数据的计算机软件和硬件。