[发明专利]用于生肉和加工肉类产品的肉种鉴定的LC/MS/MS分析

说明书

本发明涉及用于检测肉类样品被另一类型的肉类污染的设备、方法和试剂盒，其使用鉴定特异性针对特定类型的肉类的肽的母离子‑子离子跃迁监测。检测的肉类类型可包括猪肉、牛肉、羔羊肉、鸡肉、鸭肉和/或马肉和其一或多种组合。

相关申请

本申请要求2016年9月8日提交的美国临时申请第62/384,925号的优先权，其全部内容以引用的方式并入本文中。

技术领域

本案涉及肉类样品中的污染的分析和鉴定。

背景技术

食品标准局(FSA)(英国的独立政府部门)在2013年1月宣布已在由若干连锁超市出售的牛肉产品中鉴定出马和/或猪的脱氧核糖核酸(DNA)分子。跨越和超出欧洲的随访测试已显示此类污染广泛发生。其它肉种存在于假设纯的特定肉类产品样品中已引起普遍关注。污染可能是肉类产品中存在非所需量的猪肉、牛肉、羔羊肉、鸡肉、鸭肉和/或马肉中的一或多种的结果。

但是，大部分现有测试方法基于使用聚合酶链反应(PCR)来检测肉类中的物种特异性DNA，其为费时的且不检测或鉴定蛋白质。这是一个问题，因为DNA可以在标准肉类加工和食品制造期间容易地破坏或去除。结果是马肉组织或其它污染物仍未在食物样品中被发现，尽管强有力地存在污染性蛋白质。替代性的基于蛋白质的方法，酶联免疫吸附分析(ELISA)可用于补充DNA测试。但是，ELISA方法仅检测蛋白质的一部分且不检测多种蛋白质标记物。

已提出若干检测潜在肉类污染的方法。2016年6月21日公布且以引用的方式并入本文中的美国专利第9,373,486号传授用于检测肉类污染的MRM引发的检测和测序(MIDAS)工作流。分析化学(Anal.Chem.)2015 87 10315-10322(其内容以引用的方式并入本文中)描述基于MRM的技术，所述技术聚焦于检测肌血球素源性肽以检测包括马肉、牛肉、猪肉和羔羊肉的未申报肉类的存在。如此参考文献中所指示，由于例如缺乏信号质量、不同物种之间的非独特性等问题，并非所有来自给定动物的肽均适用作标记物。

所属领域中需要可靠地检测肉类样品中猪肉、牛肉、羔羊肉、鸡肉、鸭肉和/或马肉的肉类污染的存在的简化方式。

发明内容

根据本传授内容的各种实施例，描述不需要化学标记而在一或多种样品中鉴定一或多种不同肉种的存在的方法。在各种实施例中，方法包含使用母离子-子离子跃迁监测(PDITM)在样品中鉴定一或多种不同肉种的存在。在各种实施例中，方法可用于在肉类样品中鉴定猪肉、牛肉、羔羊肉、鸡肉、鸭肉和/或马肉中的一或多个的存在。对于每一物种唯一的胰蛋白酶肽可以使用本文中描述的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)和母离子-子离子跃迁来观测。

术语“母离子-子离子跃迁监测”或“PDITM”是指例如使用质谱的测量，从而选择第一质量分离器的传输质荷比(m/z)范围(通常称为质谱的第一尺寸且可被描述为Q1)以将分子态离子(通常称为“母离子”或“前体离子”)传输至离子碎裂器(例如碰撞室、光致解离区等)，以产生碎片离子(通常称为“子离子”)，且选择第二质量分离器的传输m/z范围(通常称为质谱的第二尺寸且可被描述为Q3)以将一或多个子离子传输至测量子离子信号的检测器。监测的母离子和子离子质量的组合可称为监测的“母离子-子离子跃迁”或前体-子离子跃迁。在检测器处所监测的给定母离子-子离子组合的子离子信号可以称为“母离子-子离子跃迁信号”。在本传授内容的各种实施例中，母离子为衍生自对于动物物种唯一的蛋白质的肽序列且监测的母离子-子离子跃迁对于所述动物是唯一的。