[发明专利]用于病原性微生物检测的方法及试剂盒

说明书

本发明作为能够用于高灵敏度地检测流感病毒等病原性微生物的技术，提供一种病原性微生物检测方法，是检测生物试样中的病原性微生物的方法，该方法包括：导入步骤，向下层部与上层部之间的空间导入包含所述生物试样、和成为存在于所述病原性微生物的表面或内部的酶所致的反应的底物的物质的亲水性溶剂，所述下层部形成有能够收容所述病原性微生物的多个收容部，所述上层部与该下层部的形成有该收容部的面相面对；封入步骤，向所述空间导入疏水性溶剂，在所述收容部内形成由疏水性溶剂包覆并且包含所述病原性微生物和所述物质的亲水性溶剂的液滴；检测步骤，以光学方式检测因所述液滴中的所述酶与所述物质的反应而生成的反应产物，所述亲水性溶剂具有大于所述反应产物的酸解离常数(pKa)的pH值。

技术领域

本发明涉及用于病原性微生物检测的方法及试剂盒。更具体而言，涉及如下的方法等，即，在由疏水性溶剂包覆的亲水性溶剂的极小容积中，以光学方式检测病原性微生物的表面或内部的酶所致的反应的结果所生成的反应产物，由此进行病原性微生物的检测。

背景技术

近年来，开发出使用了免疫层析法的简便的流感病毒检查试剂盒(参照专利文献1)。使用免疫层析法的方法可以在数分钟到数十分钟之间检测流感病毒，因此在感染的诊断、治疗等中得到有效利用。

另外，以往，已知有基于作为流感病毒所具有的酶的神经氨酸酶(ノイラミニダーゼ)与显色底物的反应而以光学方式检测流感病毒的技术(参照专利文献2、3)。作为显色底物，例如使用4－甲基伞形酮基－α－D－神经氨酸(4－methylumbelliferyl－N－acetyl－α－D－neuraminic acid：4MU－NANA、参照专利文献2)、4－烷氧基－N－乙酰神经氨酸或4，7－二烷氧基－N－乙酰神经氨酸的衍生物(参照专利文献3)等。例如，在使用4MU－NANA作为显色底物的方法中，通过基于神经氨酸酶的4MU－NANA的分解而生成作为荧光物质的4－甲基伞形酮。基于所生成的4－甲基伞形酮的量可以算出神经氨酸酶的酶活性值，进而基于酶活性值可以对流感病毒的粒子数进行定量。

与本发明相关联，在非专利文献1中，记载有如下的方法，即，液滴被油所包覆，使用能够从外部直接接近液滴的飞升水平的液滴阵列，进行单分子酶测定。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2008－275511号

专利文献2：日本特开2011－139656号

专利文献3：日本特表2002－541858号

非专利文献

非专利文献1：S.Sakakihara et al.，Lab Chip，2010，10，3355-3362。

发明内容

发明所要解决的问题

虽然基于上述的免疫层析法的流感病毒的检测方法简便，然而为了检测需要10³～10⁴pfu/ml左右的病毒，有检测灵敏度低的问题。

因而，本发明的主要目的在于，提供一种能够用于高灵敏度地检测流感病毒等病毒的技术。

用于解决问题的方法

为了解决上述的问题，本发明提供以下的[1]～[25]。

[1]一种方法，是检测从感染了病原性微生物的对象或有感染的嫌疑的对象中分离出的生物试样中的所述病原性微生物的方法，

该方法包括：