[发明专利]用于病原性微生物检测的方法及试剂盒在审
申请号: | 201780054148.5 | 申请日: | 2017-09-04 |
公开(公告)号: | CN109689882A | 公开(公告)日: | 2019-04-26 |
发明(设计)人: | 野地博行;田端和仁 | 申请(专利权)人: | 国立研究开发法人科学技术振兴机构 |
主分类号: | C12Q1/04 | 分类号: | C12Q1/04;C12M1/34;C12Q1/34;C12Q1/70;G01N33/483 |
代理公司: | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人: | 曹阳 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 病原性微生物 亲水性溶剂 检测 下层 收容 疏水性溶剂 生物试样 上层部 液滴 光学方式检测 流感病毒 酸解离常数 高灵敏度 所述空间 试剂盒 包覆 底物 | ||
1.一种方法,
是检测从感染了病原性微生物的对象或有感染的嫌疑的对象中分离出的生物试样中的所述病原性微生物的方法,
该方法包括:
导入步骤,向下层部与上层部之间的空间导入包含所述生物试样、和成为存在于所述病原性微生物的表面或内部的酶所致的反应的底物的物质的亲水性溶剂,所述下层部由具有疏水性的上表面的侧壁彼此隔开地形成有能够收容所述病原性微生物的多个收容部,所述上层部与该下层部的形成有该收容部的面相面对;
封入步骤,向所述空间导入疏水性溶剂,在所述收容部内形成由疏水性溶剂包覆并且包含所述病原性微生物和所述物质的亲水性溶剂的液滴;以及
检测步骤,以光学方式检测因所述液滴中的所述酶与所述物质的反应而生成的反应产物,
所述亲水性溶剂具有大于所述反应产物的酸解离常数pKa的pH值。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,
所述病原性微生物为流感病毒,
所述酶为神经氨酸酶,
所述物质为4-甲基伞形酮基-α-D-神经氨酸,
所述反应产物为4-甲基伞形酮。
3.一种试剂盒,用于检测从感染了病原性微生物的对象或有感染的嫌疑的对象中分离出的生物试样中的所述病原性微生物,
该试剂盒包含:
阵列,其具备下层部和上层部,所述下层部由具有疏水性的上表面的侧壁彼此隔开地形成有能够收容所述病原性微生物的多个收容部,所述上层部与所述下层部的形成有所述收容部的面隔开空间地相面对;
物质,其成为存在于所述病原性微生物的表面或内部的酶所致的反应的底物;
亲水性溶剂,其具有大于因所述酶与所述物质的反应而生成的反应产物的酸解离常数pKa的pH值;以及
疏水性溶剂。
4.一种方法,在与疏水性溶剂发生界面接触的亲水性溶剂中使酶与成为该酶所致的反应的底物的物质反应、并检测反应产物,
所述亲水性溶剂具有大于所述反应产物的酸解离常数pKa的pH值。
5.根据权利要求4所述的方法,其中,
所述亲水性溶剂包含病原性微生物,
所述酶为存在于所述病原性微生物的表面或内部的具有底物切割活性的酶,
所述物质为显色底物,
以光学方式检测因所述酶所致的所述显色底物的切割而生成的反应产物。
6.根据权利要求5所述的方法,其中,
所述病原性微生物为流感病毒,
所述酶为神经氨酸酶,
所述显色底物为4-甲基伞形酮基-α-D-神经氨酸,
所述反应产物为4-甲基伞形酮。
7.根据权利要求5或6所述的方法,其中,
所述亲水性溶剂包含从感染了所述病原性微生物的对象或有感染的嫌疑的对象中分离出的生物试样。
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