[发明专利]细胞穿透肽(CPP)-介导的EV加载

权利要求书

1.一种用至少一种药理学试剂加载细胞外囊泡(EV)的方法，其包括将EV群体暴露于至少一种药理学试剂和至少一种细胞穿透肽(CPP)。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种药理学试剂和所述至少一种CPP以共价缀合物、非共价复合物和/或其组合的形式存在。

3.根据权利要求2所述的方法，其中包括在所述共价缀合物中的所述CPP和所述药理学试剂通过化学键结合在一起，所述化学键选自包括以下的组：酯键、酰胺键、二硫键、硫醚键、生物素-链霉亲和素键合或任何共价化学相互作用。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括电穿孔步骤和/或基于脂质的转染试剂的使用。

5.一种用至少一种药理学试剂加载EV的方法，其包括以下步骤：

i.将EV源细胞群体暴露于至少一种药理学试剂和至少一种CPP；和，

ii.收获由所述EV源细胞产生的EV，其中所述EV包括所述药理学试剂。

6.根据权利要求5所述的方法，其进一步包括将步骤(i)与所述EV源细胞的电穿孔组合。

7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中CPP和药理学试剂之间的所述非共价复合物以具有正或负ζ电位的纳米颗粒的形式存在。

8.通过根据前述权利要求中任一项所述的方法可获得的EV。

9.一种EV，其包括与至少一种CPP缀合或复合的至少一种药理学试剂。

10.一种EV，其包括至少一种药理学试剂，其中所述至少一种药理学试剂从所述EV内部的至少一种CPP缀合物和/或至少一种CPP复合物释放。

11.根据权利要求8到10中任一项所述的EV，其中所述药理学试剂是抗癌剂、细胞抑制剂、DNA或RNA嵌入剂、剪接调节剂、酪氨酸激酶抑制剂、他汀、NSAID、抗生素、抗真菌剂、抗菌剂、抗炎剂、抗纤维化剂、抗高血压剂、芳香酶抑制剂、酯酶抑制剂、抗胆碱能剂、SSRI、BKT抑制剂、PPAR激动剂、HER抑制剂、AKT抑制剂、BCR-ABL抑制剂、信号转导抑制剂、血管生成抑制剂、合成酶抑制剂、ALK抑制剂、BRAF抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、脑啡肽酶抑制剂、β2激动剂、CRTH2拮抗剂、FXR激动剂、BACE抑制剂、鞘氨醇-1-磷酸酯受体调节剂、MAPK抑制剂、刺猬(Hedgehog)信号传导抑制剂、MDM2拮抗剂、LSD1抑制剂、内酰胺酶抑制剂、TLR激动剂、TLR拮抗剂、IDO抑制剂、ERK抑制剂、Chk1抑制剂、基于核酸的试剂(例如，寡核苷酸、siRNA、shRNA、反义寡核苷酸、剪接转换寡核苷酸、mRNA、肽、天然产物、多肽)及其任何组合。

12.根据权利要求8到11中任一项所述的EV，其中所述CPP选自包括以下的组：转运肽(transportan)、转运肽10、穿透素(penetratin)、CADY肽(例如，CADY-1)、MTS、VP22、MAP、KALA、PpTG20、富含脯氨酸的肽、MPG肽、PepFect肽(例如，PF14、PF15、PF23、PF24、PF25、PF26、PF27、PF6)、Pep肽、Pip肽、L-寡聚物、降钙素-肽、富含精氨酸的CPP(例如，多聚精氨酸)、Tat、胡蜂蜂毒肽、富含脯氨酸的肽、MPG肽及其任何组合。

13.根据权利要求8到12中任一项所述的EV，其进一步包括靶向部分。

14.根据权利要求13所述的EV，其中所述靶向部分包括表达为具有EV多肽的融合蛋白或附着到所述EV表面的抗体的氨基酸序列。