[发明专利]靶向人LMNA的寡核苷酸类似物

说明书

提供了靶向LMNA的反义寡核苷酸，其用于降低编码早衰蛋白的一种或多种异常剪接的LMNA mRNA同种型的表达。

关于序列表的声明

与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且据此以引用方式并入到本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是120178_503WO_SEQUENCE_LISTING.txt。所述文本文件为约6.5KB，于2017年4月26日创建，并且通过EFS web以电子方式提交。

技术领域

本公开大体上涉及靶向人核纤层蛋白A的反义化合物。

背景技术

早年衰老综合症(Hutchinson-Gilford progeria syndrome,HGPS)是一种罕见的遗传性病症，其特征是早发性动脉硬化和血管平滑肌细胞(SMC)的退化。HGPS本身最显著地表现为受影响儿童的加速、过早衰老。患有HGPS的儿童具有进行性症状，诸如生长迟缓、脱发、皮下脂肪减少和骨异常。平均寿命为12年，其中最常见的死亡原因是心肌梗塞或中风。

大多数HGPS病例是由核纤层蛋白A(LMNA)基因中的单点突变引起的，从而导致产生早衰蛋白(progerin)，其是核纤层蛋白A的截短剪接突变体。单点突变是核纤层蛋白A(LMNA)基因的外显子11中的从头沉默取代(1824CT，Gly608Gly)。所述取代激活了隐蔽的剪接供体位点，这导致产生具有内部缺失50个氨基酸的显性失活突变体核纤层蛋白A蛋白。所述突变蛋白，命名为早衰蛋白，积聚在核膜上，从而引起特征性的核突起(nuclearblebbing)((Scaffidi和Misteli 2005；Cao,Blair等2011))。

已知可使用二氨基磷酸酯吗啉代寡核苷酸(phosphorodiamidate morpholinooligonucleotide,PMO)，或更具体地，剪接转换寡核苷酸(splice-switchingoligonucleotide,SSO)来校正异常剪接。SSO通过在位点处或附近杂交来阻断异常剪接位点，从而阻止由细胞剪接机构的识别。示例性SSO对核酸酶具有抗性，并且所得的双链结构消除了由RNA酶H进行RNA切割的可能性。已证明SSO在体外和体内均有效地修复地中海贫血和杜兴肌营养不良症的剪接模式。(Kinali,Arechavala-Gomeza等2009；Svasti,Suwanmanee等2009)。通过在细胞培养物(Scaffidi和Misteli 2005)和相关动物模型(Osorio,Navarro等2011)中使用靶向激活的隐蔽剪接位点的修饰反义寡核苷酸校正异常剪接事件，已显示与HGPS相关的LMNA的异常剪接减少。

PCT公开WO 2013/086441和WO 2013/086444公开了靶向人lmna的反义寡聚物和使用靶向人lmna的寡核苷酸类似物治疗早衰样核纤层蛋白病的方法，但没有公开本公开的反义寡聚物化合物和其使用方法。

鉴于LMNA在HGPS中的作用，需要调节LMNA前mRNA的剪接以消除早衰蛋白表达的寡核苷酸。

发明内容

本公开的实施方案整体涉及反义寡聚物药物组合物和使用其调节LMNA前mRNA的异常剪接的方法。在一个方面，本公开的特征在于一种具有10至40个核碱基的修饰的反义寡核苷酸。修饰的反义寡核苷酸包括与LMNA的前mRNA内的靶区域互补的靶向序列。

在某些实施方案中，反义寡聚物是式(I)的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中每个Nu是核碱基，它们一起形成靶向序列；

Z是8至38的整数；

T选自：

并且