[发明专利]用二价阳离子分离核酸和用阳离子螯合剂洗脱的方法

权利要求书

1.一种分离核酸的方法，其中所述方法包括以下步骤：

(a)提供包括核酸的结合混合物；

(b)使所述结合混合物与极性固体支持物相接触，使得核酸吸附到所述固体支持物的表面；

(c)去除未结合的结合混合物；

(d)用洗涤缓冲液来洗涤所述固体支持物；以及

(e)添加洗脱缓冲液并从所述固体支持物中去除核酸。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗涤缓冲液包括水溶液中的二价阳离子。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述二价阳离子是来自周期表第II组的碱土金属。

4.根据权利要求2或权利要求3所述的方法，其中所述二价阳离子采取其氯化物形式。

5.根据权利要求2到4中任一权利要求所述的方法，其中所述二价阳离子是钙离子或钡离子。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述二价阳离子是钙离子。

7.根据权利要求2到6中任一权利要求所述的方法，其中所述二价阳离子的浓度在0.1mM与10mM之间，优选在1mM到5mM之间。

8.根据权利要求2到7中任一权利要求所述的方法，其中所述核酸通过络合二价阳离子而从所述固体支持物的表面去除。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述洗脱缓冲液包括螯合剂。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述螯合剂络合所述洗涤缓冲液中提供的所述二价阳离子，从而促进所述核酸从所述固体支持物的表面去除。

11.根据权利要求9或权利要求10所述的方法，其中所述螯合剂是EGTA、EDTA、EDDS、MGDA、IDS、聚天冬氨酸或GLDA，优选EGTA。

12.根据权利要求8到11中任一权利要求所述的方法，其中所述螯合剂的浓度在0.1mM与5mM之间，优选浓度在0.1mM与1mM之间。

13.根据权利要求8到12中任一权利要求所述的方法，其中所述洗脱缓冲液的pH值在pH7.0与pH 10.0之间，优选pH值在pH 7.0与pH 9.0之间。

14.根据权利要求1到7中任一权利要求所述的方法，其中所述核酸通过将所述固体支持物的pH升高到碱性条件而从所述固体支持物的表面去除。

15.根据权利要求13所述的方法，其中所述洗脱缓冲液的pH值在pH 7.1与pH 10.0之间，优选在pH 8.0与pH 10.0之间，更优选在pH 9.0与pH 10.0之间。

16.根据权利要求1到7中任一权利要求所述的方法，其中所述核酸通过以下从所述固体支持物的表面去除：升高所述固体支持物的温度并且络合如权利要求8到13中任一权利要求所定义的二价阳离子和/或将所述固体支持物的pH升高到如权利要求14或权利要求15所定义的碱性条件。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述温度升高到至少30℃，优选其中所述温度升高到30℃与75℃之间。

18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述固体支持物的表面结合二价阳离子。

19.根据权利要求18所述的方法，其中二价阳离子与所述固体支持物的表面的所述结合导致核酸吸附到所述固体支持物的表面。