[发明专利]用于产生羟基酪醇的宿主细胞和方法

权利要求书

1.组合物，其包含：(a)第一宿主细胞，其能够产生L-DOPA；和(b)第二宿主细胞，其能够将L-DOPA转化为羟基酪醇(HTy)；其中所述第一宿主细胞和所述第二宿主细胞中的任一者或两者是经遗传修饰的宿主细胞。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述第一宿主细胞是第一经遗传修饰的宿主细胞，并且所述第二宿主细胞是第二经遗传修饰的宿主细胞。

3.如权利要求1所述的组合物，其中所述第一宿主细胞包含二氢蝶啶还原酶(DHPR)、蝶呤-4-α-甲醇胺脱水酶(PCD)和酪氨酸羟化酶(TH)或者它们的任何同源酶。

4.如权利要求3所述的组合物，其中DHPR、PCD和TH中的一种或多种是所述第一宿主细胞异源的。

5.如权利要求1所述的组合物，其中相比未工程化的细胞，所述第一宿主细胞经工程化过量产生酪氨酸，并且所述第一宿主细胞包含酪氨酸羟化酶(TH)或其同源酶。

6.如权利要求5所述的组合物，其中所述第一宿主细胞过表达AroG或其同源酶，和/或TyrA或其同源酶。

7.如权利要求6所述的组合物，其中所述第一宿主细胞还包含用于合成L-酪氨酸的以下酶中的一种或多种或全部或者它们的相应同源酶：磷酸烯醇丙酮酸合酶(PpsA)、转酮醇酶A(TktA)、DAHP合酶(AroG)、DHQ合酶(AroB)、DHQ脱水酶(AroD)、奎尼酸/莽草酸脱氢酶(YdiB)、莽草酸脱氢酶(AroE)、莽草酸激酶I/II(AroK/L)、EPSP合酶(AroA)、分支酸合酶(AroC)、分支酸变位酶/预苯酸脱氢酶(TyrA)和酪氨酸氨基转移酶(TyrB)。

8.如权利要求7所述的组合物，其中PpsA、TktA、AroG、AroB、AroD、YdiB、AroE、AroK/L、AroA、AroC、TyrA和TyrB中的一种或多种是所述第一宿主细胞异源的。

9.如权利要求8所述的组合物，其中所述第一宿主细胞在M9Y确定成分培养基(1％葡萄糖)中生长或培养时，所述第一宿主细胞能够产生2.0mM或更多的L-酪氨酸。

10.如权利要求9所述的组合物，其中所述第一宿主细胞在M9Y确定成分培养基(1％葡萄糖)中生长或培养时，所述第一宿主细胞能够产生2.6mM或更多的L-酪氨酸。

11.如权利要求1所述的组合物，其中所述第二宿主细胞包含L-DOPA脱羧酶(DDC)、酪胺氧化酶(TYO)和醇脱氢酶(ADH)或者它们的任何同源酶。

12.如权利要求11所述的组合物，其中DDC、TYO和ADH中的一种或多种是所述第二宿主细胞异源的。

13.用于产生羟基酪醇(HTy)的方法，其包括：

(a)提供能够产生L-DOPA的第一宿主细胞；

(b)培养所述第一宿主细胞以产生第一培养物；

(c)提供能够将L-DOPA转化为羟基酪醇(HTy)的第二宿主细胞；

(d)培养所述第二宿主细胞以产生第二培养物；

(e)合并或混合所述第一培养物和第二培养物以产生共培养物；

(f)在组合物中培养所述第一宿主细胞和第二宿主细胞，使得HTy产生；以及

(g)任选地从所述共培养物提取或分离HTy；

其中所述第一宿主细胞和所述第二宿主细胞中的任一者或两者是经遗传修饰的宿主细胞。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述第一宿主细胞是第一经遗传修饰的宿主细胞，并且所述第二宿主细胞是第二经遗传修饰的宿主细胞。