[发明专利]增强用于纯化蛋白质的色谱法的性能的方法

说明书

本申请描述了用于从蛋白质制剂，例如包含重组蛋白的细胞培养收获物中移除污染物的组合物、试剂盒和方法。本文所述的方法可以增强后面应用的色谱纯化步骤的性能。所述方法通常包括使包含所需蛋白质的蛋白质制剂与尿囊素、阳离子聚合物和脂肪酸的组合接触，从而形成固体并使用合适的过程移除所述固体。所述方法由以下例证：尿囊素、辛酸与选自壳聚糖、聚二烯丙基二甲基氯化铵(pDADMAC)和聚烯丙胺的阳离子聚合物的组合。通过使经处理的样品与化学反应性表面接触的进一步处理而进一步增强了第一纯化步骤所获得的结果。

相关申请的交叉引用

本专利申请要求以下专利申请的权益：于2017年3月29日提交的新加坡专利申请No.10201702562T，名称为“增强用于纯化抗体的色谱法的性能的方法(A METHOD OFENHANCING THE PERFORMANCE OF CHROMATOGRAPHY METHODS FOR PURIFICATION OFANTIBODIES)”，发明人为Peter Gagnon，代理人案号为BTI/P/09507/02/SG；于2016年6月15日提交的新加坡专利申请No.10201604895U，其名称为“增强抗体纯化方法的性能的方法(AMETHOD OF ENHANCING THE PERFORMANCE OF ANTIBODY PURIFICATION METHODS)”，发明人为Peter GAGNON、Phyllicia TOH Yan Ling和Wei ZHANG，代理人案号为BTI/P/09507/01/SG；以及于2016年6月15日提交的新加坡专利申请No.10201604898V，其名称为“增强用于纯化抗体的色谱法的性能的方法(A METHOD OF ENHANCING THE PERFORMANCE OFCHROMATOGRAPHY METHODS FOR PURIFICATION OF ANTIBODIES)”，发明人为Peter GAGNON、Phyllicia TOH Yan Ling和Wei ZHANG，代理人案号为BTI/P/09507/00/SG。上述申请的全部内容通过引用并入本文，包括所有文本、表格和附图。

技术领域

本发明涉及蛋白质纯化领域。更具体地，本发明涉及预先移除干扰蛋白质(例如，重组蛋白和抗体)的色谱纯化的污染物的过程。

背景技术

在纯化之前澄清细胞培养收获物的概念是已知的。历史上已经观察到通过消除会堵塞用于进行纯化的色谱柱的固体来帮助蛋白质和抗体纯化的实践。一些由Singh等人[1]评估的澄清方法使用添加剂和/或调节条件来沉淀可溶性DNA。这包括将收获物的pH降低至4.0至4.5的范围、添加钙、以及添加多种阳离子聚合物来结合带负电荷的DNA。这些阳离子聚合物之一是壳聚糖。Riske等人[2]报道了0.02％至0.05％的壳聚糖将细胞沉降速率从几小时降低到30分钟至60分钟。这提高了过滤性，但没有显著提高蛋白质A亲和色谱的后续纯化性能。本领域已知的另一种阳离子聚合物是pDADMAC(聚二烯丙基甲基氯化铵(polydiallylmethylammonium chloride))。McNerny等人[3]表明，pDADMAC本身的效用有限，但与聚乙二醇组合形成了更大的颗粒，减少了沉降时间。然而，尽管使用的pDADMAC浓度为0.4％或更高，但与壳聚糖一样，后续纯化方法的性能基本保持不变。Kang等人研究了一种阳离子聚合物，称为聚苄烯丙胺与过量磷酸根离子的组合[4]。

本领域的一项单独的工作已经确定了一小组可溶性污染物，所述污染物特别地干扰了传统的纯化方法，如选择性沉淀和色谱，包括蛋白质A亲和色谱。这些污染物特别地包括由与非染色质相关的宿主细胞蛋白(HCP)和其它污染物强烈相关的持久性核小体阵列组成的染色质异源聚集体(heteroaggregates)。虽然其仅占总污染物负荷的2％至5％，但已表明其是干扰后续色谱步骤的性能的主要因素，其中其降低了容量、扩大了污染并且降低了抗体回收率等[5-8]。