[发明专利]HPV L2肽免疫原性的改善

说明书

本发明涉及一种免疫原性多肽，其包含许多与HPV16的L2多肽的氨基酸20‑50对应的人乳头瘤病毒(HPV)L2N‑端肽，其中所述HPV L2N‑端肽是来自至少两种不同HPV基因型的L2N‑端肽。本发明也涉及用于用在药物中和用于用在对抗HPV感染的疫苗接种中的所述免疫原性多肽。此外，本发明涉及编码所述免疫原性多肽的多核苷酸和包含它们的宿主细胞。此外，本发明涉及与本发明的免疫原性多肽有关的试剂盒、方法和用途。

本发明涉及一种免疫原性多肽，其包含许多与HPV16的L2多肽的氨基酸20-50对应的人乳头瘤病毒(HPV)L2 N-端肽，其中所述HPV L2 N-端肽是来自至少两种不同HPV基因型的L2 N-端肽。本发明也涉及用于用在药物中和用于用在对抗HPV感染的疫苗接种中的所述免疫原性多肽。此外，本发明涉及编码所述免疫原性多肽的多核苷酸和包含它们的宿主细胞。此外，本发明涉及与本发明的免疫原性多肽有关的试剂盒、方法和用途。

宫颈癌是世界上女性的第二最常见的癌症。临床和分子研究已经证实，某些类型的人乳头瘤病毒(HPV)(被称作高危类型)是该疾病的病原。两种用于预防宫颈癌的抗-HPV疫苗最近已经被Merck(Gardasil^TM)和GlaxoSmithKline(Cervarix^TM)批准(Schmiedeskamp等人,(2006),Ann Pharmacother,40:1344-1352)。两种疫苗依赖于呈病毒样颗粒(VLP)形式的主要衣壳蛋白L1作为抗原(Roden等人,(2006),Nat Rev Cancer,6:753-763)；它们会保护免于L1-VLP的来源HPV类型，但是对除了最密切相关的HPV类型以外的全部类型在很大程度上是无效的。两种最突出的高危HPV类型16和18是两种疫苗的主要靶标，尽管存在对HPV类型31和45的部分交叉保护的证据(综述见Muller和Gissmann,(2007),Dis Markers,23:331-336；Huh和Roden,(2008),Gynecol Oncol,109:S48-56)。基于L1的疫苗的有限交叉保护能力(这是开发改进的疫苗接种策略的持续努力的主要原因)可能反映了L1中和表位的HPV类型特异性(Giroglou等人,(2001),Vaccine,19:1783-1793)。

针对次要衣壳蛋白L2的抗体也会中和HPV感染，且经常能够交叉中和多种非同源病毒粒子，尽管具有不同的效能(Kondo等人(2007),Virology,358:266-272；Gambhira,R.,(2007),J Virol,81:13927-13931)。L2的N-端区域与靶细胞表面上的迄今未鉴别的第二受体相互作用(Yang等人(2003),JVirol,77:3531-3541)，并且该相互作用可以被抗-L2抗体阻断。参与HPV-细胞表面相互作用的L2区域的精确身份仍然是讨论的主题。这最初被提议为包含氨基酸(aa)108-120的区域，且靶向该特定L2区域的抗体实际上被证实会在体外阻断病毒感染，尽管在低滴度(Kawana等人(2001),Vaccine,19:1496-1502；Kawana等人(2001b),J Virol,75:2331-2336)。随后的实验鉴别了氨基酸1-88区域(Pastrana等人(2005),Virology,337:365-372)以及在包含氨基酸11-200和氨基酸18-144的更延长的N-端区域(Kondo在上述引文中)中的另外的中和表位。这些N-端表位中的最显著者可能是位于氨基酸17-36之间的一个。这被鉴别为HPV16中和性和保护性单克隆抗体(RG-1)的靶标以及在血清中发现的中和活性的主要决定簇，所述血清来自用L2的延长形式(氨基酸1-88、11-200或全长蛋白)免疫的兔和人类(Gambhira,2007,在上述引文中)。由于已经发现L2氨基酸18和19或氨基酸20和21的突变会破坏L2与细胞表面的结合和病毒感染(Yang,R.,等人(2003),J.Virol.77:3531-3541)，结论是，由RG-1抗体识别的表位与HPV16 L2的表面结合基序重叠。