[发明专利]用于医学的人血小板裂解物来源细胞外囊泡

说明书

本发明涉及人血小板裂解物或富集人血小板裂解物来源细胞外囊泡的级分及其在医学中的用途，特别是用于预防和/或治疗炎症驱动的疾病、神经变性疾病、免疫/自身免疫病、心血管疾病、皮肤病、矫形外科疾病、组织再生医学、肿瘤疾病、感染性疾病、移植排斥、卒中、缺血或移植物抗宿主病。本发明还涉及制备药物制剂或诊断制剂或美容制剂的方法，其包括以下步骤：向药物制剂或诊断制剂或美容制剂添加人血小板裂解物或富集人血小板裂解物来源细胞外囊泡的级分。

背景技术

已知人血小板裂解物(human platelet lysate，hPL)是人细胞培养中胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)的替代补充物。其通常出于实验和临床目的而用于补充人间充质干细胞培养中的基础培养基。与传统使用的FBS相比，hPL是有利的，因为其不含异源物(xenogen)，并因此适合于产生用于细胞治疗的治疗性产品。hPL呈现为浑浊的浅黄色液体，其获自通过冷冻/解冻循环对人血小板进行的裂解。凭借血小板的生理组织修复功能，血小板是多种生物活性分子的丰富来源，所述生物活性分子例如生长因子、细胞因子(包括趋化因子和白介素)、其他代谢物和细胞外囊泡(extracellular vesicle，EV)。在储存和裂解期间，血小板释放大量生长因子和尺寸为约40至1000nm的细胞外囊泡(EV，例如外排体(exosome)、微泡(microvesicle)、凋亡小体)。这些分泌的囊泡被称为人血小板裂解物来源细胞外囊泡(human platelet lysate derived extracellular vesicle，hPLEV)。在过去数年中，数种hPL相关GMP产品进入市场，目的是用于细胞培养体系，例如，来自Stem CellTechnologies、Macopharma、COMPASS Biomedical和PL BioSciences的产品。最近，图宾根临床输血医学中心(Center for Clinical Transfusion Medicine in Tübingen)已通过图宾根当地政府机关根据德国药品法(German Drug Law，AMG)获得人血小板裂解物的制造许可证。这样的hPL制品根据其在人中使用的监管要求是干细胞培养所需的。与此同时，hPL是用于培养人干细胞(尤其是间充质干细胞)的金标准。在GMP洁净室条件下获得的人血小板裂解物被认为是用于药物制造(例如用于临床试验或用于制造许可用于细胞治疗的药物产品)的“人源原料”。

虽然hPL在干细胞培养中的价值是公认的，但hPL中单因子(例如生长因子和EV)的特性尚未得到详细分析。虽然来自hPL的EV尚未被认为具有临床意义，但来源于不同干细胞(例如MSC)的EV越来越多地成为临床和治疗兴趣的焦点。

已知EV在细胞之间、器官之间和甚至生物体之间传递信息，并且已经在多种体液(例如血液、尿、脑脊液、母乳和唾液)中检测到。外排体和微泡构成最显著描述的EV种类。其被磷脂膜包围，并且包含以下的细胞类型特异性组合：蛋白质，包括酶、生长因子、受体和细胞因子；以及脂质；编码和非编码RNA、mRNA、微RNA(miRNA)或甚至少量DNA；以及代谢物。外排体限定为内体区室的尺寸为70至170nm(+/-20nm，这根据文献和分析技术而不同)的衍生物。由于平均尺寸为100至1000nm，微泡代表通过质膜向外出芽形成的一类较大EV。在本申请中，术语EV包含所有上述囊泡。

目前，显示只有干细胞来源EV被广泛认为和讨论具有根据治疗目的的治疗潜力。WO 2012/053976公开了使用由人间充质干细胞分泌的外排体来促进毛发生长和创伤愈合。这些作用结合外排体免疫调节负荷而公开。WO 2012/053976推测了外排体制剂的免疫调节作用。

WO 2014013029 A1涉及来源于新生儿或成人组织来源间充质干细胞(mesenchymal stem-cell，MSC)的外排体制剂用于预防或治疗炎性病症例如出生前和出生后获得性脑损伤(即神经元损伤)或干细胞移植后免疫并发症(“移植物抗宿主病(Graftversus Host-Disease)”，GvHD)的用途。