[发明专利]稳定的假型化慢病毒颗粒及其用途

权利要求书

1.一种浓缩稳定的慢病毒颗粒制剂，所述慢病毒颗粒用选自HERV-W、HERV-FRD和鼠合胞素-A的内源性逆转录病毒合胞素(ERV合胞素)假型化且包装有异源目标基因，其在制剂的冷冻和解冻之前或之后包含高于1x10⁵ng p24/mL的物理颗粒的滴度和/或高于2x10⁴TU/mL的感染性颗粒的滴度。

2.获得权利要求1所述的浓缩稳定的假型化慢病毒颗粒制剂的方法，包括以下步骤：

a)在合适的细胞系中转染至少一种质粒，其中所述至少一种质粒包含所述异源目标基因、慢病毒rev、gag和pol基因和编码选自HERV-W、HERV-FRD和鼠合胞素-A的ERV合胞素的序列；

b)孵育a)中获得的转染细胞，使得它们产生用ERV合胞素假型化且包装有所述异源目标基因的所述稳定的慢病毒颗粒；和

c)收获并浓缩b)中获得的稳定的慢病毒颗粒，以获得浓缩稳定的慢病毒颗粒制剂，其在制剂的冷冻和解冻之前或之后包含高于1x10⁵ng p24/mL的物理颗粒的滴度和/或高于2x10⁴TU/mL的感染性颗粒的滴度。

3.权利要求2所述的方法，其中所述慢病毒rev、gag和pol基因是HIV-1rev、gag和pol基因。

4.通过权利要求2或3任一项所述的方法获得的颗粒制剂。

5.权利要求1或4所述的颗粒制剂，其中感染性颗粒的滴度高于1x10⁵TU/mL，和/或其中物理颗粒的滴度高于1.1x10⁵ng p24/mL。

6.权利要求2或3所述的方法，其中感染性颗粒的滴度高于1x10⁵TU/mL，和/或其中物理颗粒的滴度高于1.1x10⁵ng p24/mL。

7.一种药物组合物，包含药学可接受的介质中的权利要求1、4或5任一项所述的颗粒制剂。

8.权利要求1、4或5任一项所述的颗粒制剂用于转导免疫细胞的非治疗体外用途。

9.权利要求1、4或5任一项所述的颗粒制剂用于工程化免疫细胞的非治疗体外用途。

10.权利要求1、4或5任一项所述的颗粒制剂在制备用于治疗免疫缺陷、自身免疫、感染性疾病或B细胞相关癌症的药物中的用途。

11.一种药物组合物，包含药学可接受的介质中的用权利要求1、4或5任一项所述的颗粒制剂感染的B细胞或树突细胞。

12.获得经修饰以表达异源目标基因的免疫细胞的非治疗离体方法，包括用权利要求1、4或5任一项所述的颗粒制剂感染免疫细胞，任选地之前刺激的步骤。

13.权利要求12所述的非治疗离体方法，其中它是在LAH4肽或其功能性衍生物存在下进行，和/或其中所述免疫细胞选自B细胞、树突细胞、单核细胞和巨噬细胞。

14.权利要求12或13任一项所述的非治疗离体方法，其中包括以下步骤：

-任选地，通过在包含IL-7的培养基中培养初始免疫细胞来刺激它们，然后

-在LAH4肽或其功能性衍生物存在下，用权利要求1、4或5任一项所述的颗粒制剂感染刺激或未刺激的初始免疫细胞。