[发明专利]通过测序5-羟甲基化无细胞DNA的无创诊断

权利要求书

1.经富集的无细胞DNA样品组合物，其包含：

连接了衔接物的无细胞DNA分子库，所述DNA分子直接分离自患者血浆并且来自多个不同组织类型并且包含一个或多个羟甲基胞嘧啶，所述羟甲基胞嘧啶被修饰成包含作为捕获标记物的生物素部分，所述DNA分子还包括表明其来源并使不同来源的序列在分析后被区分开的分子条码；

内标对照组合物，其包含由dATP、dGTP、dTTP、和(1)dCTP、(2)dmCTP或(3)dhmCTP和dCTP的混合物合成的三种扩增子；和

链霉亲和素载体，

其中：

所述样品组合物富含包含一个或多个羟甲基胞嘧啶的无细胞DNA分子，所述羟甲基胞嘧啶被修饰成包含所述捕获标记物，使得组合物中至少90％的无细胞DNA分子包含一个或多个羟甲基胞嘧啶；和

所述无细胞DNA分子库包括被修饰成包含与链霉亲和素载体连接的生物素部分的模板羟甲基化DNA分子，以及在扩增过程中产生的模板羟甲基化DNA分子的拷贝。

2.根据权利要求1所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中多个组织类型包括10种或更多种组织类型。

3.根据权利要求2所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中多个组织类型包括100种或更多种组织类型。

4.根据权利要求3所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中多个组织类型包括1000种或更多种组织类型。

5.根据权利要求1所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中表明来源的分子条码包含在所述衔接物中。

6.根据权利要求5所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中所述DNA分子还包含鉴别每一个分子的条码。

7.根据权利要求1所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中所述模板羟甲基化DNA分子通过所述捕获标记物连接至固体载体。

8.根据权利要求1所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中所述内标对照组合物包含：

由包含dATP、dGTP、dTTP和dCTP的混合物合成的扩增子；

由包含dATP、dGTP、dTTP和dmCTP的混合物合成的扩增子；

由包含dATP、dGTP、dTTP和dhmCTP的混合物合成的扩增子。

9.根据权利要求8所述的经富集的无细胞DNA样品组合物，其中由包含dATP、dGTP、dTTP、dCTP和dhmCTP的混合物合成扩增子。