[发明专利]热稳定的蛋白酶及其制备和使用方法

权利要求书

1.地衣芽孢杆菌kerA蛋白酶的多肽变体，该变体蛋白酶选自如下所示的序列：

a.A298P：N322S：S363D，其序列如SEQ ID NO：1所示；N322S，其序列如SEQ ID NO：2所示；G222S：N265C：N322S，其序列如SEQ ID NO：3所示；P145E：A298P：N322S：S363D，其序列如SEQ ID NO：4所示；N322S：S363D，其序列如SEQ ID NO：5所示；P145E：N322S，其序列如SEQID NO：6所示；N265C：N322S，其序列如SEQ ID NO：7所示；P145E：A298P：S363D，其序列如SEQID NO：8所示；N265C，其序列如SEQ ID NO：9所示；G222S：N265C，其序列如SEQ ID NO：10所示；G222S：N227Y，其序列如SEQ ID NO：11所示；N265C：G270R，其序列如SEQ ID NO：12所示；P145E：S363D，其序列如SEQ ID NO：13所示；或G222S：N227Y：N265C A298P，其序列如SEQ IDNO：14所示；或

b.在如(a)部分所示序列的任一端添加小的氨基-或羧基-末端延伸、多达20-25个残基的小接头肽和/或有助于纯化的多肽。

2.一种多核苷酸，其编码权利要求1所述的变体蛋白酶。

3.一种核酸构建体或表达载体，其包括权利要求2所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸与一种或多种控制序列可操作地连接，所述控制序列指导变体蛋白酶在表达宿主细胞中产生。

4.一种重组表达宿主细胞，其包括编码权利要求1所述的变体蛋白酶的多核苷酸，其中所述多核苷酸与一种或多种控制序列可操作地连接，所述控制序列指导变体蛋白酶产生；所述重组表达宿主细胞不选自植物细胞或动物细胞。

5.一种产生权利要求1所述的变体蛋白酶的方法，包括培养重组表达宿主细胞，所述重组表达宿主细胞包括编码权利要求1所述的变体蛋白酶的多核苷酸，其中所述多核苷酸与一种或多种控制序列可操作地连接，所述控制序列指导变体蛋白酶在有利于产生变体蛋白酶的条件下产生。

6.根据权利要求5所述的方法，还包括回收变体蛋白酶。

7.一种全培养液制剂或细胞培养组合物，其包括权利要求1所述的变体蛋白酶。

8.一种动物饲料，其包括权利要求1所述的变体蛋白酶，其中所述变体蛋白酶的量为6000-3000000U/kg饲料。

9.根据权利要求8所述的动物饲料，其中所述动物饲料是家禽或猪饲料。

10.一种动物饲料添加剂，其包括权利要求1所述的变体蛋白酶。

11.根据权利要求10所述的动物饲料添加剂，还包括脂溶性维生素、水溶性维生素或微量矿物质及其组合中的一种或多种。

12.一种用于改善动物饲料的营养价值的方法，包括将权利要求1所述的变体蛋白酶添加到动物饲料中。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述动物饲料是家禽或猪饲料。