[发明专利]防止重结晶的冷冻保存培养基和方法

权利要求书

1.用于在非低温冷冻温度下保存细胞的培养基，其包含：

亲水且无毒的高分子；

含水液体；和

冷冻保护剂；

其中所述高分子在所述培养基中的浓度等于或大于约20％(w/v)，且

其中所述高分子的分子在溶解于所述含水液体中时形成形状为球形的致密的三维结构。

2.权利要求1的培养基，其进一步包含悬浮于所述培养基中的所述细胞。

3.权利要求2的培养基，其中在所述非低温冷冻温度下，所述致密且球形的结构在具有所述细胞的所述培养基的未冷冻部分中浓缩，并且其中拥挤效应防止在所述非低温温度下贮存期间的冰重结晶。

4.权利要求1-3中任一项的培养基，其中所述培养基中所述高分子的浓度为约25％(w/v)或更大。

5.权利要求4的培养基，其中所述培养基中所述高分子的浓度为约35％(w/v)或更大。

6.权利要求5的培养基，其中所述培养基中所述高分子的浓度为约50％(w/v)或更大。

7.权利要求1-6中任一项的培养基，其中所述冷冻保护剂的浓度等于或大于所述培养基中所述高分子浓度的约20％，优选等于或大于约50％。

8.权利要求7的培养基，其中所述培养基中所述冷冻保护剂的所述浓度等于或大于所述培养基中所述高分子浓度的约75％。

9.权利要求8的培养基，其中所述培养基中所述冷冻保护剂的所述浓度等于或大于所述培养基中所述高分子浓度的约100％。

10.权利要求1-9中任一项的培养基，其中所述高分子是聚合物。

11.权利要求10的培养基，其中所述聚合物包含在溶解于所述含水液体中时形成形状呈大致球形的所述致密三维结构的分子。

12.权利要求11的培养基，其中所述聚合物选自下组：球形亲水性多糖、聚合的环糊精或糖类、球状蛋白质(globular protein)或球形蛋白质(spheroprotein)、通过将寡糖链附着到那些球状蛋白质形成的球形糖蛋白、那些球状蛋白质的其他衍生物及其组合。

13.权利要求12的培养基，其中所述聚合物是亲水性多糖。

14.权利要求13的培养基，其中所述聚合物是通过蔗糖和表氯环氧丙烷(epichlorohydrin)的共聚合形成的聚合物。

15.权利要求1-14中任一项的培养基，其中所述冷冻保护剂选自下组：二甲基亚砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇及其组合。

16.权利要求1-15中任一项的培养基，其中所述含水液体选自下组：细胞培养基、营养培养基、盐水及其组合。

17.权利要求16的培养基，其中所述含水液体选自下组：血清、FBS(胎牛血清)、DMEM(Dulbecco改良Eagle培养基)、HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、FHM(冲洗-保持培养基)、PBS(磷酸盐缓冲盐水)、DPBS(Dulbecco磷酸盐缓冲盐水)、RPMI(Roswell ParkMemorial Institute培养基)、BF5培养基、EX-CELL培养基、溶原性肉汤(LB)培养基、CaCl₂水溶液、NaCl水溶液、KCl水溶液及其组合。

18.权利要求2-17中任一项的培养基，其中所述悬浮细胞是真核细胞，优选哺乳动物细胞。