[发明专利]编码含报告分子、底物和去稳定化部分的多肽的重组多核苷酸，含其的宿主细胞及其用途

权利要求书

1.一种重组多核苷酸，其包括编码多肽的第一多核苷酸，所述多肽包括：报告分子部分；去稳定化部分；可操作地连接所述报告分子部分与所述去稳定化部分的底物部分，其中所述底物部分包括蛋白酶活性的切割位点。

2.根据权利要求1所述的重组多核苷酸，其中，所述蛋白酶是神经毒素多肽，并且所述神经毒素多肽是肉毒杆菌毒素血清型A(BoNT/A)，BoNT/B，BoNT/C，BoNT/CD，BoNT/D，BoNT/DC，BoNT/E，BoNT/F，BoNT/FA，BoNT/G或破伤风神经毒素(TeNT)。

3.根据权利要求1所述的重组多核苷酸，其还包含多核苷酸，所述多核苷酸编码：连接在所述第一多核苷酸的上游或下游的双顺反子序列；以及可操作地连接在所述双顺反子序列的上游或下游的内标报告分子。

4.根据权利要求3所述的重组多核苷酸，其中，所述双顺反子序列是内部核糖体进入位点(IRES)序列或允许核糖体跳过形成肽键的核苷酸序列。

5.一种宿主细胞，其包含权利要求1所述的重组多核苷酸。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是能够将神经毒素多肽转移到细胞质中的细胞。

7.根据权利要求5所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞是NT2细胞、SiMa细胞或NG108-15细胞。

8.根据权利要求5所述的宿主细胞，其中，所述宿主细胞包含编码蛋白酶的外源多核苷酸，例如具有蛋白水解活性的神经毒素多肽。

9.一种测定样品中神经毒素多肽的蛋白水解活性的方法，该方法包括使权利要求5所述的宿主细胞与怀疑含有神经毒素多肽的样品接触；以及

测量由所述报告分子部分在通过接触获得的产物中发射的信号。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述重组多核苷酸进一步包含多核苷酸，所述多核苷酸编码连接在第一多核苷酸的上游或下游的双顺反子序列和可操作地连接在所述双顺反子序列的上游或下游的内标报告分子。

11.根据权利要求9所述的方法，其还包括在所述接触之前在培养基中培养所述宿主细胞以分化成神经元细胞。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述宿主细胞是NT2细胞、SiMa细胞或NG108-15细胞。

13.一种测量宿主细胞表达或抑制蛋白酶的能力的方法，该方法包括：将编码蛋白酶多肽的多核苷酸引入权利要求5所述的宿主细胞中；培养已引入所述多核苷酸的所述宿主细胞，并测量培养物中所述报告分子部分或所述内标报告分子或者所述报告分子部分或所述内标报告分子的产物发出的信号。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述培养在测试材料存在下进行。