[发明专利]羟腈裂解酶

权利要求书

1.一种方法，其为来自千足虫的羟腈裂解酶即HNL基因的制造方法，其包含：

从属于倍足纲的生物中存在的基因中，选择具有编码来自千足虫的HNL的保守氨基酸序列TAX¹DIX²G(序列号15)的碱基序列和编码VPNGDKIH(序列号16)的碱基序列中的至少一种的基因，其中，X¹为L或F，X²为R或K。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基因的选择通过将属于倍足纲的生物中存在的基因作为模板，使用由编码所述保守氨基酸序列的碱基序列构成的至少1个DNA作为引物进行PCR来实施。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基因的选择通过将属于倍足纲的生物中存在的基因作为模板，使用由编码所述保守氨基酸序列的碱基序列构成的DNA作为探针，进行DNA-DNA杂交来实施。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基因的选择通过对属于倍足纲的生物中存在的基因进行测序，从被测序的基因序列中选择具有编码所述保守氨基酸序列的碱基序列的基因来实施。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，属于倍足纲的生物中存在的基因是从属于倍足纲的生物中提取的基因组DNA或由属于倍足纲的生物中提取的RNA通过逆转录而得到的cDNA。

6.根据权利要求2所述的方法，其中，所述引物为下述的缩聚引物HNL-FW和HNL-RV、或HNL-FW2及HNL-RV2，

HNL-FW：CTGCAACTGCATTGGAMATTCAAGG(序列号21)、

HNL-RV：ATGAATCTTRTCRCCGTTTGGAAC(序列号22)、

HNL-FW2：SSAACTGCATTGGAYATMMRAGG(序列号23)、

HNL-RV2：ATGAATCTTRTCRCCRTTTGGRAC(序列号24)。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其中，属于倍足纲的生物为Nedyopustambanus mangaesinus、雅丽酸带马陆(Oxidus gracilis)、Parafontaria falcifera、Parafontaria laminata、Parafontaria tonominea、或Riukiaria。

8.一种方法，其为来自千足虫的HNL的制造方法，其包含：

通过权利要求1～7中任一项所述的方法制备来自千足虫的HNL基因，使得到的HNL基因在宿主细胞内表达，得到HNL。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述宿主细胞为昆虫培养细胞。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述宿主细胞为具有二硫键异构酶表达能力的大肠杆菌。

11.一种基因，其具有下述(4)～(6)中的任一个碱基序列，

(4)具有序列表的序列号2、4、6、8、10、12、14、84、86、88或90中记载的碱基序列，且编码具有HNL活性的蛋白的碱基序列；

(5)具有在序列表的序列号2、4、6、8、10、12、14、84、86、88或90中记载的碱基序列中具有1～50个碱基的缺失、替换和/或附加的碱基序列，且编码具有HNL活性的蛋白的碱基序列；或者

(6)具有与序列表的序列号2、4、6、8、10、12、14、84、86、88或90中记载的碱基序列在严格条件下杂交的碱基序列，且编码具有HNL活性的蛋白的碱基序列。

12.一种质粒，其在载体中包含权利要求11所述的基因。