[发明专利]PD-L1和KDR的双特异性结合蛋白

说明书

提供了双特异性结合蛋白，例如与人PD‑L1和人KDR结合的双特异性抗体。所述双特异性结合蛋白可用于治疗以免疫抑制和/或过度血管生成为特征的疾病和病状。

相关申请案的交叉引用

本申请要求2016年2月2日提交的美国临时申请第62/290,350号的优先权。该申请的内容通过引用整体并入本文。

发明领域

本文提供了双特异性结合蛋白，其包含结合人PD-L1的第一结合区和结合人KDR的第二结合区。还提供了制备双特异性结合蛋白的方法和使用双特异性结合蛋白治疗需要减少或抑制免疫抑制或减少或抑制血管生成的疾病或病状的方法。

发明背景

程序性死亡受体1(PD-1)是CD28受体家族的成员，该家族包含CD28、CTLA-4、PD-1、ICOS和BTLA的(Freeman等(2000)J Exp Med 192:1027-34；Latchman等(2001)Nat Immunol2:261-8)。PD-1是免疫病理状态进展期间，活化T细胞和B细胞上主要上调的诱导型免疫抑制受体。PD-1与其配体PD-L1的相互作用导致对TCR和BCR介导的增殖和细胞因子生成的抑制以及通过内源性PD-1介导的基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)的负信号传导诱导抗原特异性T细胞凋亡(Agata等(1996)Int.Immunol.8:765,Unkeless和Jin.(1997)Curr.Opin.Immunol.9:338-343,Okzaki等(2001)PNAS98:13866-71,Dong等(2002)Nat.Med.8:793-800)。PD-L1是细胞表面糖蛋白并且是PD-1的主要配体。在细胞活化后，在淋巴组织和非淋巴外周组织上PD-L1也可诱导。除免疫细胞外，PD-L1在多种受影响的细胞类型，包括癌细胞和基质细胞中上调，并且在疾病恶化过程中在免疫抑制上起积极作用(Iwai等(2002)PNAS 99:12293-7，Ohigashi等(2005)Clin Cancer Res 11:2947-53)。已将PD-L1上调与多种癌症和病毒感染的不良临床结果联系起来(Hofmeyer等(2011)J.BioMed.Biotech.2011:1-9,McDermott和Atkins.(2013)Cancer Med.2:662-73)。在临床前和临床环境中，抗体对PD-1或PD-L1的阻断促进CD8 T细胞浸润、CTL活性和存在的Th1细胞因子IFN-γ增加(Zhou等(2010)J.Immunol.185:5082-92,Nomi等(2007)Clin CancerRes.13:2152-7,Flies等(2011)YaleJ.Bio.Med.48:409-21，Zitvogel和Kroemer.(2012)OncoImmunol.1:1223-25)。已经证实作为免疫调节剂的PD-L1抗体在用作单一疗法或与其它免疫抑制分子的抗体组合时有效。

VEGFR是受体酪氨酸激酶，并且与PDGF和成纤维细胞生长因子(FGF)属于相同的受体家族。KDR(也称为VEGFR2)是结合VEGF同种型A、C、D和E的受体。它在内皮细胞分化和VEGF促有丝分裂、血管生成和渗透性增强效应中起作用。KDR是200kDa糖蛋白，由细胞外结构域中的7个Ig样环、跨膜结构域和由激酶插入物分开的两个细胞内酪氨酸激酶结构域组成。第二和第三Ig样环是VEGF的高亲和力配体结合结构域，而第一和第四Ig样环分别调节配体结合和受体二聚化。与VEGFR1的25pM的Kd相比，VEGF结合KDR的Kd为75-250pM。KDR主要在血管内皮细胞的细胞表面上表达。KDR也存在于造血细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)和一些恶性细胞的细胞表面。

血管生成是生长新血管的高度复杂过程，其涉及毛细血管内皮细胞从预先存在的血管增殖和迁移以及组织浸润，细胞组装成管状结构，新形成的管状组件与闭路血管系统连接，以及新形成的毛细血管成熟。