[发明专利]使用双吡啶改善亲核物质的标记

权利要求书

1.一种用于非诊断和非治疗目的的在体外标记感兴趣的亲核物质的方法，所述方法包括将所述亲核物质与溶液一起孵育的步骤，所述溶液包含(a)溶剂，所述溶剂为二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，(b)与所述亲核物质反应的亲电子标签，和(c)可溶于所述溶剂的双吡啶，从而标记所述亲核物质，其中所述亲核物质是在所述孵育步骤之前从糖蛋白释放的糖胺，且所述亲电子标签选自8-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基羰基氨基]萘-1,3,5-三磺酸、4-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基羰基氨基]苯甲酸和4-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基羰基氨基]苯甲酸2-(二乙基氨基)乙基酯，和

其中所述双吡啶为4,4’-(1,3-丙二基)双吡啶或4,4’-(1,2-乙二基)双吡啶。

2.根据权利要求1所述的方法，其中进一步地，通过酶促消化从所述糖蛋白释放所述糖胺。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述糖蛋白的所述酶促消化包括通过酶PNGase F的消化。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述亲电子标签在水性溶液中是酸性的。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述亲电子标签在水性溶液中是碱性的。

6.一种用于非诊断和非治疗目的的标记从感兴趣的糖蛋白释放的N-聚糖的方法，所述方法包括：

(a)将所述糖蛋白与酶一起孵育，所述酶从所述糖蛋白释放作为糖胺的所述N-聚糖，和

(b)在允许通过胺反应性标签来标记所述糖胺的条件下，将所述糖胺与包含为二甲基甲酰胺或二甲基亚砜的溶剂、所述胺反应性标签选自8-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基羰基氨基]萘-1,3,5-三磺酸、4-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基羰基氨基]苯甲酸和4-[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基羰基氨基]苯甲酸2-(二乙基氨基)乙基酯和双吡啶的溶液接触，从而标记从所述糖蛋白释放的所述N-聚糖，

其中所述双吡啶为4,4’-(1,3-丙二基)双吡啶或4,4’-(1,2-乙二基)双吡啶。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述糖蛋白是抗体。

8.根据权利要求6所述的方法，其中进一步地，在步骤(b)之前将所述糖蛋白固定在固体支持物上。

9.根据权利要求6所述的方法，其中进一步地，所述酶为去糖基化酶。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述去糖基化酶为内切糖苷酶。

11.根据权利要求9所述的方法，其中进一步地，所述去糖基化酶是酰胺酶。

12.根据权利要求11所述的方法，其中进一步地，所述酰胺酶是PNG F。

13.根据权利要求6所述的方法，其中进一步地，为所述标记的糖胺提供分析方法。

14.根据权利要求13所述的方法，其中，所述分析方法选自由高压液相色谱、毛细管电泳、微流体分离和质谱分析组成的组。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述分析方法是高压液相色谱。

16.根据权利要求14所述的方法，其中所述分析方法是质谱分析。