[发明专利]用于治疗疱疹病毒感染的手段和方法

说明书

本发明提供疱疹病毒，比如EBV，所述疱疹病毒缺少至少一种病毒miRNA。此类缺少至少一种病毒miRNA的疱疹病毒有利地不能将其基因组包装到衣壳中，由此产生HVLP，该HVLP基本上不含其疱疹病毒基因组或编码HVLP的蛋白质部分的核酸分子和病毒miRNA。这种HVLP可以用作疫苗。

背景技术

Epstein-Barr病毒(EBV)是一种致癌性疱疹病毒，其感染全世界人口的90％以上，但特别对免疫受损的宿主造成巨大威胁。EBV导致许多急性和慢性、炎性、自身免疫和恶性障碍，包括几种类型的免疫抑制患者中严重的和危及生命的淋巴组织增生性疾病。有风险的患者是实体器官或造血干细胞移植(SOT/SCT)候选者以及HIV感染患者，和先天性免疫缺陷患者。EBV-相关的PTLD的一个重要危险因素是移植时的血清阴性，这解释了PTLD在儿童中特别高的发生率。根据移植类型的不同，高达15％的儿科移植患者会受到影响，最终其中有20％的患者死于PTLD(Mynarek等，Clin Dev Immunol.2013；2013：814973)。

EBV是普遍存在的且具有免疫原性。这种致癌性疱疹病毒(IARC Working Group，IARC Monogr.Eval.Carcinog.Risks Hum.94，46-70(2010))已经进化出多种基因从而在其感染建立时抵御免疫应答(Ressing等，Semin.Cancer Biol.18，397-408(2008))。然而，这些病毒基因不会在B淋巴细胞(EBV的主要靶细胞)感染时立即积聚。因此，早期感染应该是EBV致命的弱点，这是EBV不免除宿主免疫反应的窗口。

预防性疫苗被认为是减轻EBV-相关的恶性和非恶性疾病负担的最有效步骤。在儿童和青少年中不仅PTLD而且传染性单核细胞增多症(IM)以及地方性Burkitt淋巴瘤均是被识别为预防性EBV疫苗的适应症的疾病(Balfour，Curr Opin Virol.，2014，vol.6，pp.1-5；Cohen等，Sci Transl Med.，2011，3(107)：107fs7；Cohen等，Vaccine，2013，31Suppl 2：B194-6)。这些疾病也是计划性VLP疫苗的功效试验的次要目标。在几乎40年前Epstein制定了第一个疫苗提案，但仍然没有可行的疫苗。除了类人灵长类动物之外的易处理的动物模型的缺乏以及病毒的复杂性显著阻碍了进展。大多数预防EBV感染或相关疾病的疫苗努力均集中在gp350上，gp350是病毒粒子的最丰富的糖蛋白，也是天然存在的中和抗体的主要靶标。具有可溶性形式gp350的疫苗接种降低了EBV血清阴性成人中的IM率，但对EBV感染率没有影响(Sokal等，J Infect Dis.，2007，196(12)：1749-53)。另一种基于gp350的疫苗在等待移植的具有慢性肾疾病的EBV阴性儿童中诱导抗体应答，但未能预防EBV-相关疾病的移植后不良后果(Rees等，Transplantation，2009，88(8)：1025-9)。总之，少数临床疫苗接种试验表明，针对EBV-相关疾病的预防性疫苗接种是可行的，但该试验还证明，目前的疫苗接种策略需要大大改进，以预防所有疫苗接种者的原发感染和/或EBV-相关疾病。因此，迫切需要一种针对EBV的疫苗。

本申请的发明人揭示，EBV在感染原代B-细胞时利用其编码的miRNA有效地抑制了适应性免疫应答的多个分支。这些miRNA控制抗原特异性T细胞活化和识别所需的全部三种信号：(i)抗原肽加工并呈递至T细胞；(ii)EBV感染的B细胞上的调节T细胞活化的重要辅助受体(co-receptor)的水平；和(iii)将初始(naive)CD4⁺T细胞极化为抗病毒Th1辅助细胞的促炎和其它细胞因子的分泌，由此miRNA保护新感染的B淋巴细胞免于免疫消灭，从而使EBV终生成功。即，本申请的发明人发现EBV的miRNA直接靶向细胞基因以抑制细胞因子的分泌、抗原加工、EBV特异性CD4+和CD8+T细胞对病毒感染细胞的识别和/或初始T细胞向抗病毒Th1细胞的分化。单一病原体的多种miRNA对适应性免疫应答的多种和大规模抑制是出乎意料且前所未有的。