[发明专利]多路总抗体和抗体缀合的药物量化测定法

权利要求书

1.一种量化抗体缀合的药物和抗体-药物缀合物的总抗体浓度二者的方法，其包含：

(a)使抗体-药物缀合物(ADC)与还原抗体以形成变性抗体的组合物接触；

(b)消化变性抗体以形成单一分析样品中的消化抗体-药物缀合物肽混合物；并

(c)通过LC-MS/MS分析消化抗体-药物缀合物肽混合物以在单一分析样品中检测至少一种抗体签名肽和药物模块。

2.权利要求1的方法，其中在接触步骤之前，在选自缓冲液，全血，血清，血浆，脑脊液，唾液，尿液，淋巴，胆汁，粪，汗液，玻璃状液，泪液，和组织的基质中悬浮ADC。

3.权利要求1的方法，其中在消化步骤之前，通过选自大小排阻层析，透析，选择性沉淀，差速离心，过滤，凝胶电泳，液相层析，反相层析，免疫沉淀，包括蛋白A和蛋白G，NHS和链霉亲合素铁或磷或固定化抗体或凝集素的SpinTrap柱，顺磁性珠，免疫消减，分级，固相萃取，磷酸肽富集，聚丙烯酰胺凝胶电泳，和脱盐的技术富集ADC。

4.权利要求1的方法，其中使ADC结合至亲和捕捉介质。

5.权利要求4的方法，其中亲和捕捉介质是珠或树脂支持的蛋白A/G，靶抗原-顺磁性珠捕捉介质，抗独特型抗体，抗Hu抗体，和抗药物抗体中的至少一项。

6.权利要求4的方法，其进一步包含清洗结合至亲和捕捉介质的ADC以减少与ADC接触的非抗体蛋白质。

7.权利要求4的方法，其进一步包含使结合至亲和捕捉介质的ADC去磷酸化。

8.权利要求4的方法，其中消化变性抗体以形成消化抗体-药物缀合物肽混合物的步骤在使ADC结合至亲和捕捉介质同时发生。

9.权利要求4的方法，其进一步包含在酶促消化ADC的步骤之前自亲和捕捉介质洗脱ADC。

10.权利要求1的方法，其中还原抗体的组合物包含至少一种选自二硫苏糖醇(DTT)，2-巯基乙醇，和三(2-羧基乙基)膦(TCEP)的还原剂。

11.权利要求10的方法，其中还原抗体的组合物进一步包含至少一种选自甲酰胺，二甲基甲酰胺，乙腈，SDS，脲，酸不稳定性表面活性剂，癸基呋喃基磺酸盐，和盐酸胍的变性剂。

12.权利要求1的方法，其中还原抗体的组合物包含至少一种选自甲醇，乙醇，HCl，碳酸氢铵，Tris缓冲液，HEPES，乙酸铵，和乙腈的化学制品。

13.权利要求1的方法，其中消化变性抗体的步骤包含在矿物酸，三氟乙酸，甲酸存在下的酸水解，用溴化氰的蛋白质水解，和250℃以上的热诱导的蛋白质水解中的至少一项。

14.权利要求1的方法，其中消化变性抗体的步骤包含使变性抗体与蛋白质裂解酶接触。

15.权利要求14的方法，其中蛋白质裂解酶是胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，木瓜蛋白酶，胃蛋白酶，LysN，LysC，AspN，GluC，ArgC，和PNGaseF中的至少一项。

16.权利要求1的方法，其中消化变性抗体的步骤包含使药物与变性抗体分开。

17.权利要求1的方法，其中消化变性抗体的步骤进一步包含使变性抗体与自变性抗体切割药物的化学制品接触。

18.权利要求4的方法，其进一步包含在分析消化抗体-药物缀合物肽混合物的步骤之前自亲和捕捉介质洗脱消化抗体-药物缀合物肽混合物。