[发明专利]多基因组逆转录病毒载体制剂及用于产生及使用该制剂的方法和系统

说明书

本发明提供新型多基因组逆转录病毒载体，用于制备及使用所述逆转录病毒载体的方法和包装系统。

技术领域

本发明提供新型多基因组逆转录病毒载体，以及用于制备所述逆转录病毒载体的方法和包装系统。

背景技术

逆转录病毒载体是用于基因递送的常用工具，因为逆转录病毒载体能够递送感兴趣的核酸进入多种多样的细胞，这使它们非常适于将基因转移进入细胞。逆转录病毒载体已被用于针对感染性疾病和癌症的基因治疗和治疗性疫苗。然而，来自单一逆转录病毒载体基因组的多种转基因的表达(多顺反子表达)常常导致不等同表达水平的重组蛋白，这归因于，例如，不同的启动子对转录因子的竞争，或内部核糖体进入位点(IRES)的功能的变化性。在将核酸递送至树突细胞的情况中，已观察到表达、抗原加工或呈递(尤其是某些肿瘤抗原)水平上的干扰现象。

本发明提供了经改善的逆转录病毒载体以及制备该载体的方法，其促进多种转基因的表达。

发明内容

本发明的一方面提供一种重组多基因组逆转录病毒载体制剂，其包含：a)第一逆转录病毒颗粒，其包含两个拷贝的第一逆转录病毒载体基因组，该第一逆转录病毒载体基因组含有感兴趣的第一序列；b)第二逆转录病毒颗粒，其包含两个拷贝的第二逆转录病毒载体基因组，该第二逆转录病毒载体基因组含有感兴趣的第二序列；c)第三逆转录病毒颗粒，其包含一个拷贝的含有感兴趣的第一序列的第一逆转录病毒载体基因组，和一个拷贝的含有感兴趣的第二序列的第二逆转录病毒载体基因组；其中，所述感兴趣的第一和第二序列是不同的；其中，所述第一和第二逆转录病毒载体基因组是缺陷型逆转录病毒基因组(例如，不编码必需病毒蛋白，例如功能性gag或pol蛋白，且在进入靶细胞之后无法产生感染性颗粒)，并且其中，所述逆转录病毒载体制剂采用异源性包膜糖蛋白假型化(pseudotyped)。在本文所述的重组多基因组逆转录病毒载体制剂的某些实施方式中，第三逆转录病毒颗粒占该制剂中总逆转录病毒颗粒的至少60％，70％，80％，90％或95％。在本文所述的重组多基因组逆转录病毒载体制剂的另一实施方式中，所述异源性包膜糖蛋白选自下组：VSVg，麻疹包膜糖蛋白，和辛德毕斯包膜糖蛋白。在具体实施方式中，所述异源性包膜糖蛋白包含变体辛德毕斯病毒E2糖蛋白，且在一些实施方式中，所述变体辛德毕斯病毒E2糖蛋白结合至DC-SIGN。在一个实施方式中，本文所述的重组多基因组逆转录病毒载体制剂是慢病毒载体制剂。

在本文所述的重组多基因组逆转录病毒载体制剂的另一实施方式中，感兴趣的第一序列编码肿瘤相关抗原或一种或多种肿瘤抗原(neoantigen)，且感兴趣的第二序列编码免疫调节分子。在另一实施方式中，感兴趣的第一序列编码肿瘤相关抗原，且感兴趣的第二序列编码不同的肿瘤相关抗原。在另一实施方式中，感兴趣的第一序列编码肿瘤相关抗原，且感兴趣的第二序列编码一种或多种肿瘤抗原。在另一个实施方式中，所述一种或多种肿瘤抗原源自感兴趣的第一序列的肿瘤相关抗原。

在另一实施方式中，本文所述的重组多基因组逆转录病毒载体制剂还包含：e)第四逆转录病毒颗粒，其包含两个拷贝的第三逆转录病毒载体基因组，该第三逆转录病毒载体基因组含有感兴趣的第三序列；f)第五逆转录病毒颗粒，其包含一个拷贝的含有感兴趣的第一序列的第一逆转录病毒载体基因组和一个拷贝的含有感兴趣的第三序列的第三逆转录病毒载体基因组；和g)第六逆转录病毒颗粒，其包含一个拷贝的含有感兴趣的第二序列的第二逆转录病毒载体基因组和一个拷贝的含有感兴趣的第三序列的第三逆转录病毒载体基因组。在一个实施方式中，用以产生本文所述的多基因组逆转录病毒载体制剂的逆转录病毒载体基因组是缺陷型逆转录病毒基因组(例如，不编码必需病毒蛋白质，例如功能性gag或pol蛋白，且在进入靶细胞之后无法产生感染性颗粒)。