[发明专利]核酸前处理试剂盒和碱基序列分析方法

说明书

前处理试剂盒包含：颗粒操作用容器(10)、能与核酸选择性结合的核酸捕捉颗粒(70)、水相分离用介质(21、22、23)、两种以上的水系液体(35、31、32、38)和个体识别用核酸。个体识别用核酸包含在两种以上的水系液体中的至少一种中、或者结合在所述核酸捕捉颗粒的表面，个体识别用核酸的碱基序列包含由与所述生物试样中包含的核酸非互补的碱基序列构成的识别序列。前处理试剂盒用于从包含核酸和杂质的生物试样中分离核酸。

技术领域

本发明涉及用于从生物试样中分离纯化碱基序列分析用的核酸的核酸前处理试剂盒、以及利用该试剂盒所分离的核酸的碱基序列分析方法。

背景技术

从动植物中分离获得的血液、血清、细胞、尿、粪便等生物试样中包含的核酸的碱基序列分析对于医学检测、食品安全卫生方面的管理等是有用的。另外，各种疾病与基因组DNA序列的关系得以阐明，与之相伴，多态、变异等的碱基序列分析正日益受到关注。

在进行生物试样中的核酸的碱基序列分析时，为了排除由蛋白质、糖、脂质等多种多样的杂质所引起的不良影响，需要进行生物试样的前处理，对核酸进行分离纯化。分离纯化后的核酸根据需要利用PCR法等进行扩增后，利用碱基序列分析装置进行分析。

能够同时分析多个试样的集束毛细管型的碱基序列分析装置有所普及，通常以下述方式进行分析：制作由预先制备的多个样本试样构成的库，同时对各试样的碱基序列进行分析。另外，近年来，开发出采用了各种原理的下一代测序技术，碱基序列分析能力得以飞跃性地提高。

利用碱基序列分析装置的分析实现了自动化，因此，在碱基序列分析的阶段，几乎不会发生因人为错误所引起的样本试样的拿错、试样间的污染。另一方面，在从供碱基序列分析的生物试样中分离纯化核酸等的前处理中，在开放系统中进行移液或试样向其它容器的移动等的操作。因此，在碱基序列分析的前处理操作中，有时会发生试样间的污染，存在检测结果的可靠性降低的风险。

在专利文献1～3中提出了下述前处理装置，其利用油相或凝胶状介质等不溶或难溶于水的水相分离用介质将容器内分离成多个空间，在通过分离用介质隔开的空间装填有细胞裂解液、清洗液、核酸洗脱液等水系液体。具体而言，专利文献1中公开了下述装置，其在装填于容器内的油等封入介质中存在多个液滴、以及能选择性地吸附核酸的磁性二氧化硅珠。在该装置中，通过磁场操作使存在于液滴内的磁性二氧化硅珠依次向其它液滴内移动，从而能够实施核酸的纯化、扩增反应。

在专利文献2中公开了下述装置，其在一侧具有能封闭的开口端的管状容器内交替地层叠了细胞裂解液、清洗液、核酸洗脱液等水系液体层、及难溶或不溶于水的凝胶层。在专利文献3中公开了下述芯片装置，其在形成于基板表面的槽内交替地配置了水系液体层和凝胶层。在这些装置中，多个水系液体间被凝胶隔开，通过使磁性二氧化硅珠沿着管的长度方向依次向细胞裂解液、清洗液、核酸洗脱液移动，由此能够实施核酸的纯化。

专利文献1～3中所公开的前处理装置由于能够在密闭系统中实施试样的前处理，因此能够抑制样本试样间的污染，提高碱基序列分析的可靠性。另外，这些密闭系统的前处理装置除了能用于从生物试样中分离纯化核酸之外还能够用于PCR等核酸扩增操作。若在同一密闭系统装置内实施核酸从生物试样中的分离纯化与核酸扩增，则还能够直接利用碱基序列分析装置对前处理装置中得到的试样进行分析，能够将试样间的污染抑制到最小限度。此外，由于在一个密闭系统容器内装填有两种以上的液体，因此将试样转移到其它容器的操作的次数少，还能够降低因人为错误所引起的样本试样拿错的风险。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2008-012490号公报

专利文献2：WO2012/086243号国际公开小册子

专利文献3：WO2013/094322号国际公开小册子

发明内容