[发明专利]VII型胶原α1测定

说明书

一种用于检测生物样品中的包含N末端或C末端新表位的VII型胶原α1片段的免疫测定方法，该方法包括使包括含N末端或C末端新表位的VII型胶原α1片段的生物样品与本发明的抗体接触以及测定该抗体的结合量。

技术领域

本发明涉及与包含N末端或C末端新表位的VII型胶原α1片段反应的抗体，所述抗体在检测和定量所述VII型胶原α1片段的测定中的用途，以及所述测定用于评估慢性阻塞性肺病(COPD)或系统性硬化症的用途。

背景技术

VII型胶原是连接基底膜至下间隙基质(underlying interstitial matrix)的锚原纤维(anchoring fibril)的主要组分。它由三个相同的α-1链组成，具有两个非胶原(NC)结构域和一个中心胶原(central collagenou)三股螺旋结构域。它已经在皮肤和粘膜的基底膜中被鉴定[1]。

已经主要研究了VII型胶原在营养不良型大疱性表皮松解症(一种严重的皮肤病)中的作用。VII型胶原α-1链中的突变导致异常的、减少的或不存在的锚原纤维的形成，这引起表皮与真皮分离并因此引起皮肤起泡[1]。VII型胶原也被鉴定为获得性大疱性表皮松解症(一种导致皮肤和粘膜起泡的自身免疫性疾病)中的过错蛋白。它是由针对VII型胶原NC1结构域的IgG自身抗体引起的[2]。

针对VII型胶原的自身免疫还与炎症性肠病和大疱性系统性红斑狼疮有关[3-4]。

已经鉴定了在患有系统性硬化症的患者皮肤中VII型胶原水平的上调[5]。系统性硬化症患者患有皮肤纤维化并且可能出现包括肺部的内脏纤维化。一项研究还鉴定了在哮喘猴模型中气道锚原纤维中的VII型胶原蛋白水平降低[6]。

为了评估与VII型胶原相关的致病状况，有必要产生能够检测和定量与该致病状况相关的物质(species)的测定。

Chen等人、Saleh等人和Kim等人独立开发了ELISA用于检测针对VII型胶原的NC1或NC2结构域的自身抗体[7-9]。该方法包括：用VII型胶原α-1的重组NC1和/或NC2结构域包被微量滴定板，加入感兴趣的血清样品，并使用抗人IgG抗体以检测血清样品中存在的自身抗体。

Recke等人描述了针对VII型胶原NC1结构域的自身抗体的生成，并研究了大疱性表皮松解症在人活体外模型中的致病潜力[10]。他们提出将此用作诊断工具。

Sakai等人培养了一种针对VII型胶原的单克隆抗体[11]。该mAb仅与完整的VII型胶原反应。

靶向VII型胶原的单克隆抗体和多克隆抗体可以从若干个供应商商购获得。

现已发现VII型胶原α1片段在循环中可检测到，并且可用作评估与VII型胶原相关的病理状况的潜在生物标记物。具体而言，已经鉴定了VII型胶原α1片段与病理状况COPD和系统性硬化症之间的联系。

发明内容

因此，本发明的第一方面涉及与包含N末端或C末端新表位的VII型胶原α1的片段反应的抗体，其中所述抗体结合于N末端或C末端新表位。

抗体优选为单克隆抗体，但也可以是多克隆抗体或抗体片段，其表现出期望的生物活性。

优选地，抗体不识别或结合完整的VII型胶原α1。

在优选实施方式中，抗体可以结合于包含在VII型胶原α1的非胶原氨基末端结构域(NC1)中或包含在VII型胶原α1的中心胶原结构域中的N末端或C末端新表位。