[发明专利]对ICAM-1特异性的I结构域嵌合抗原受体

说明书

本发明涉及对细胞间粘附分子‑1(ICAM‑1)特异性的嵌合抗原受体(CAR)，其包含人淋巴细胞功能相关抗原1(LFA‑1)的α_L亚基的I结构域。本发明特别涉及包含人I结构域的CAR，所述人I结构域对ICAM‑1具有不同的亲和力(1mM至1nM Kd)。包含对ICAM‑1具有低亲和力(1‑200μM Kd)的人I结构域的CAR T细胞可以避免靶向具有基础ICAM‑1表达的健康组织，同时表现出增加的对具有高ICAM‑1表达的肿瘤组织的效能和长期效力。本发明也涉及用于治疗癌症的过继性细胞治疗方法，所述方法包括将包含人I结构域的CAR‑T细胞施用给遭受癌症的受试者，其中所述CAR T细胞结合过表达ICAM‑1的癌细胞并杀死所述癌细胞。

对序列表、表或计算机程序的引用

在此与说明书一起并行地经由EFS-Web呈送作为ASCII格式文本文件的序列表，其具有序列表.txt的文件名称，具有2017年7月17日的创建日期和9.89千字节的大小。经由EFS-Web提交的序列表是说明书的部分，且特此通过引用以其整体并入本文中。

技术领域

本发明涉及包含人I结构域的对ICAM-1特异性的嵌合抗原受体。本发明具体地涉及对ICAM-1具有不同亲和力(1mM至1nM)的包含人I结构域的嵌合抗原受体。

背景技术

免疫疗法作为一种非常有前途的用于治疗癌症的方案出现。

用CAR遗传修饰T细胞是一种常见的设计肿瘤特异性T细胞的方案。可以将靶向肿瘤相关抗原的CAR(嵌合抗原受体)-T细胞输入患者(过继性细胞转移或ACT)中，从而代表一种有效的免疫疗法方案。CAR-T技术相对于化学疗法或抗体的优点是，重新程序化的经工程改造的T细胞可以在患者中繁殖和持续，并象活药物一样工作。

CAR分子由合成的结合部分组成，所述结合部分通常是抗体衍生的单链可变区片段(svFv)或任何天然抗原感知元件，其与由TCRζ链和共刺激分子(诸如CD28和/或4-1BB)组成的细胞内信号传递结构域融合^1,2。CAR介导的靶向的优点包括：1)与天然的非整合的TCR和共刺激信号传递相比，经由单个结合事件提供顺式(in-cis)活化、增殖和存活信号；2)通过独立于MHC的抗原识别绕过肿瘤细胞对MHC的下调的能力；和3)减小的活化阈值以及由CAR和抗原之间的高亲和力相互作用实现的对具有低抗原密度的肿瘤细胞的识别^3,4。

理想的CAR靶抗原将是天然的表面暴露的肿瘤新抗原，其被高度表达且在健康的组织中不可检测到。但是，由于这样的抗原的绝对稀少，许多通常被靶向的实体瘤抗原也由非肿瘤组织表达，尽管在较低的水平。对这样的抗原具有高亲和力的CAR分子可以导致健康组织的并行靶向，从而导致靶标上(on-target)肿瘤外(off-tumor)毒性，即迄今为止CAR T细胞疗法的进展的一个主要限制因素。

使用单链抗体形式构建常规CAR，并选择性地工程改造成对靶抗原具有亚-至低纳摩尔亲和力。但是，仅当靶向真实肿瘤抗原或具有最高限制水平的那些时，增加的CAR T细胞敏感性可以是一个优点^17,36。否则，增加的敏感性以降低的选择性为代价，以对抗原密度在很大程度上不敏感的方式裂解表达靶标的细胞¹⁸。

需要具有改善的治疗指数的CAR，即，可以杀死肿瘤并同时使全身毒性最小化的CAR。

附图说明

图1A-1G显示了在亲和力方面具有逐步10⁶倍变化的ICAM-1特异性的CAR的构建和它们的体外结果。

图1A:与ICAM-1形成复合物的LFA-1的示意图。将LFA-1整联蛋白的α和β链和模块结构域标记。将LFA-1和ICAM-1相互作用必需的金属离子显示在圆圈中。