[发明专利]制备颊上皮细胞悬液的方法及其用途

说明书

本发明涉及制备颊上皮细胞悬液以及在膀胱镜下将所述颊上皮细胞悬液植入成人尿道缺陷部位的方法。

本发明涉及制备颊上皮细胞悬液以及在膀胱镜下将所述颊上皮细胞悬液植入成人尿道缺陷部位的方法。

发明背景

美国专利公开号2010/0184220(颁发给M/s.The Technische UniveristyDresden)要求保护一种用于重建人或动物器官的组织移植构建体，该构建体包含生物相容性无细胞的膜和微血管膀胱内皮细胞。然而，本发明包括没有任何膜或支架的颊粘膜上皮细胞。

European Urology(《欧洲泌尿学》)53(2008)1263-1271在标题为“Tissue-Engineered Buccal Mucosa Urethroplasty-Clinical Outcomes”(组织工程颊粘膜尿道成形术-临床结果)的文章中公开了使用自体组织工程颊粘膜来治疗尿道狭窄，该颊粘膜包括接种在DED(去上皮的真皮)的乳头表面上的角质形成细胞和成纤维细胞。然而，本发明包括不在DED上接种的自体颊上皮细胞悬液。

European Urology Supplement(《欧洲泌尿学增刊》)2014:13:eV60在标题为“Reconstruction of extended urethral stricture with tissue engineeredautologous buccal mucosal graft(Mukocell)”(用组织工程自体颊粘膜移植物(Mukocell)重建延长的尿道狭窄)的文章中公开了在胶原支架表面上扩增和培养5X 5mm口腔粘膜移植物，其在三周后作为覆盖物植入。将细胞接种在胶原膜上增殖(传代数P1)。通常，每cm²≥1.X10⁵个细胞将嵌入移植物上。本发明不使用任何细胞接种的移植物，并且在植入前将自体颊上皮细胞悬液培养长达2周并与凝胶混合。

然而，本发明的方法具有更低的P0传代数，与使用传代数(P1)制备的细胞相比，P0传代数可以不改变细胞的形态、生长速率和蛋白质表达。

发明目的

本发明的目的是一种制备颊上皮细胞悬液以修复成人尿道中的缺陷的方法。该方法使用少量的颊粘膜组织进行。

另一个目的是在采用或不采用生物相容性递送系统(诸如纤维蛋白原和/或凝血酶和/或热可逆凝胶化聚合物(TGP)凝胶和/或壳聚糖等的组合)的情况下在膀胱镜下将颊上皮细胞悬液植入成人尿道的缺陷部位。

发明概述

一种制备颊上皮细胞悬液的方法，其包括：

(a)从受试者收获颊粘膜组织；

(b)用化学解离剂(dissociation agent)处理来自(a)的组织；

(c)用营养基质洗涤来自(b)的组织样品；

(d)将经洗涤组织的上皮与真皮分离；

(e)切碎、过滤以从上皮获得均匀的上皮细胞悬液；

(f)任选地接种以使细胞增殖；

(g)用一种或多种酶收获细胞单层；

(h)离心，弃去上清液；

(i)与营养基质混合；

(j)分析颊上皮细胞悬液；

(k)将0.4ml的颊上皮细胞悬液填充到V形1ml小瓶中；以及

(l)任选地运送(transporting)至与(a)中相同的受试者。