[发明专利]制备颊上皮细胞悬液的方法及其用途

权利要求书

1.一种制备颊上皮细胞悬液的方法，其包括：

(a)从受试者收获颊粘膜组织；

(b)用化学解离剂处理来自(a)的组织；

(c)用营养基质洗涤来自(b)的组织样品；

(d)将经洗涤组织的上皮与真皮分离；

(e)切碎、过滤以从上皮获得均匀的上皮细胞悬液；

(f)任选地接种以使细胞增殖；

(g)用一种或多种酶收获细胞单层；

(h)离心，弃去上清液；

(i)与营养基质混合；

(j)分析颊上皮细胞悬液；

(k)将0.4ml的颊上皮细胞悬液填充到V形1ml小瓶中；以及

(l)任选地运送至与(a)中相同的受试者。

2.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中所述受试者是成人受试者。

3.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其还包括任选地与凝胶混合，同时在膀胱镜下将所述颊上皮细胞悬液植入所述受试者的尿道的缺陷部位；其中所述凝胶选自生物相容性递送系统，诸如纤维蛋白原和/或凝血酶和/或热可逆凝胶化聚合物(TGP)凝胶和/或壳聚糖等的组合。

4.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中所述化学解离剂选自胰蛋白酶、分散酶、胶原酶、胰蛋白酶-EDTA、链霉蛋白酶、透明质酸酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶。

5.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中所述营养基质选自含有所需生长因子的DMEM、EMEM、F12、IMDM等。

6.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中所述接种在T-25和/或T-75和/或T-150烧瓶等中进行。

7.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中用于收获的酶选自胰蛋白酶-EDTA、胶原酶等。

8.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中进行的分析是外观、无菌性、支原体、内毒素、细胞计数、细胞活力、细胞纯度测试、细胞表征和核型分析。

9.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中收获的颊粘膜组织来自成人的内颊并且为约1×1.5cm²。

10.根据权利要求1所述的制备颊上皮细胞悬液的方法，其中所述运送在2至8摄氏度下进行。

11.一种在膀胱镜下将颊上皮细胞悬液植入成人尿道的缺陷部位的方法，其包括：

(a)从成人的内颊收获人颊粘膜组织；

(b)使来自(a)的组织经受化学解离剂处理；

(c)用营养基质洗涤来自(b)的组织样品；

(d)将经洗涤组织的上皮与真皮分离；

(e)切碎、过滤以从上皮获得均匀的上皮细胞悬液；

(f)任选地接种以使细胞增殖；

(g)用一种或多种酶收获细胞单层；

(h)离心，弃去上清液；

(i)与营养基质混合；

(j)分析颊上皮细胞细胞悬液；

(k)任选地将所述颊上皮细胞悬液填充到V形1ml小瓶中并运送；以及

(l)任选地与凝胶混合同时在膀胱镜下将所述颊上皮细胞悬液植入成人尿道的缺陷部位。

12.根据权利要求11所述的在膀胱镜下将颊上皮细胞悬液植入成人尿道的缺陷部位的方法，其中所述化学解离剂选自胰蛋白酶、分散酶、胶原酶、胰蛋白酶-EDTA、链霉蛋白酶、透明质酸酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶。

13.根据权利要求11所述的在膀胱镜下将颊上皮细胞悬液植入成人尿道的缺陷部位的方法，其中所述营养基质选自含有所需生长因子的DMEM、EMEM、F12、IMDM等。