[发明专利]一种通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法

说明书

本发明涉及一种通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明利用一定条件下，OP增敏剂介入刚果红与壳聚糖体系后，其共振瑞利散射光谱强度剧增，且在一定浓度范围内，共振瑞利散射光谱增强值与壳聚糖的浓度成正比，以此作为壳聚糖的定量基础，建立了测定壳聚糖的共振瑞利散射法。通过实验证明，该方法操作简单、准确性高、稳定性好，适合壳聚糖原料及复方样品中壳聚糖含量的测定。

技术领域

本发明涉及一种通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。

背景技术

壳聚糖(chitosan，CTS)广泛存在于低等生物菌类，藻类的细胞，节支动物虾、蟹、昆虫的外壳中，是地球上仅次于纤维素的第二大生物多糖，是自然界中唯一含游离氨基碱性阳离子的可食性动物纤维。壳聚糖优良的特性使其在医学、保健食品、纺织以及环保等方面均具有广泛的用途，尤其在保健食品方面的应用日益广泛。与其它食品纤维的主要不同之处在于它是唯一的一种阳离子型的天然食品纤维。主要功能包括吸附脂肪酸、胆固醇等，减少人体吸收，同时也可减缓高血压及糖尿病症状，增加细胞免疫功能，因此成为健康食品业界的宠儿。

壳聚糖含量测定方法有很多，如分光光度法、荧光法、色谱法、共振瑞利散射法及电化学法等。共振瑞利散射法测定壳聚糖的方法具有灵敏度高、操作简便等显著优点，本文利用OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法尚未见报道。

发明内容

为了克服现有技术中对于成品中壳聚糖的含量难以定量，操作技术繁琐的技术不足，本发明提供一种通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，本发明利用一定条件下OP增敏剂介入刚果红与壳聚糖体系后，其共振瑞利散射光谱强度剧增，且在一定浓度范围内，共振瑞利散射光谱增强值与壳聚糖的浓度成正比，以此作为壳聚糖的定量基础，建立了测定壳聚糖的共振瑞利散射法。通过实验证明，该方法操作简单、准确性高、稳定性好，适合壳聚糖原料及复方样品中壳聚糖含量的测定。

一种通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其包

括下述步骤：

1)绘制ΔI和不同浓度的壳聚糖的标准曲线

向10mL比色管中加入0.5mL一定浓度梯度的壳聚糖标准溶液，1.5mL的缓冲溶液，1.5mL浓度为7.6×10-3mol/L的OP乳化剂，以及0.5mL浓度为 1×10^-3mol/L的刚果红溶液，使用蒸馏水定容后充分摇匀，将其置于室温10min 后取1ml混合溶液加入石英比色皿，于F-2500型荧光分光光度计上，以λ_ex＝λ_em进行同步扫描，分别记录含壳聚糖的各检测体系在最大共振瑞利散射波长λ＝376nm处体系的共振散射强度值I，其中试剂空白在λ＝376nm处体系的共振散射强度值I₀，并计算ΔI＝I-I₀，建立ΔI与壳聚糖浓度的标准曲线C；

2)10μg/mL的样品工作液的制备：将壳聚糖胶囊去胶囊壳，称取0.04g于 100mL容量瓶中，用0.5mol/L冰醋酸溶解，定容得样品储备液。用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为10μg/mL的样品工作液。

3)样品中壳聚糖含量确定：取样品工作液1mL，按步骤1)检测方法进行测定，在λ＝376nm处测定其共振瑞利散射强度值I，并计算ΔI＝I–I₀，将ΔI代入线性回归方程求得样品中壳聚糖的含量，同时做加标回收试验。