[发明专利]一种通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法

权利要求书

1.一种通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：

1)绘制ΔI和不同浓度的壳聚糖的标准曲线

向10mL比色管中加入0.5mL一定浓度梯度的壳聚糖标准溶液，1.5mL的缓冲溶液，1.5mL浓度为7.6×10^-3mol/L的OP乳化剂，以及0.5mL浓度为1×10^-3mol/L的刚果红溶液，使用蒸馏水定容后充分摇匀，将其置于室温10min后取1ml混合溶液加入石英比色皿，于F-2500型荧光分光光度计上，以λ_ex＝λ_em进行同步扫描，分别记录含壳聚糖的各检测体系在最大共振瑞利散射波长λ＝376nm处体系的共振散射强度值I，其中试剂空白在λ＝376nm处体系的共振散射强度值I₀，并计算ΔI＝I-I₀，建立ΔI与壳聚糖浓度的标准曲线C；

2)10μg/mL的样品工作液的制备：将壳聚糖胶囊去胶囊壳，称取0.04g于100mL容量瓶中，用0.5mol/L冰醋酸溶解，定容得样品储备液。用漏斗脱脂棉过滤储备液，滤液经6000r/min，离心机离心20min，取上清液2.5mL于100mL容量瓶，定容，得浓度为10μg/mL的样品工作液。

3)样品中壳聚糖含量确定：取样品工作液1mL，按步骤1)检测方法进行测定，在λ＝376nm处测定其共振散射强度值I，并计算ΔI＝I-I₀，将ΔI代入线性回归方程，求得样品中壳聚糖的含量，同时做加标回收试验。

2.根据权利要求1所述的通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其特征在于，所述缓冲液为B-R缓冲液、甘氨酸-盐酸缓冲液、邻苯二甲酸-盐酸缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中的一种。

3.根据权利要求2所述的通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。

4.根据权利要求3所述的通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其特征在于，所述的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH为2.5。

5.根据权利要求1所述的通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其特征在于，步骤1中溶液的加入顺序为首先加入刚果红溶液，其次加入OP乳化剂，再次加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，最后加入壳聚糖溶液。

6.根据权利要求1所述的通过OP乳化剂增敏的共振瑞利散射法测定壳聚糖含量的方法，其特征在于，步骤1)中壳聚糖的浓度范围0.05～1.0μg/mL。