[发明专利]一种通过紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法

说明书

本发明涉及一种通过紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，属于大分子检测领域。本发明利用壳聚糖在醋酸‑醋酸钠缓冲溶液中，与萘酚绿B、吐温20溶液反应生成缔合物，在一定的浓度范围内，其吸光度值随壳聚糖含量的增加而增大，并且呈现一定的线性关系。以此作为壳聚糖的定量基础，建立了测定壳聚糖的紫外分光光度法，本方法受壳聚糖的分子量的影响，具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简便等优点。

技术领域

本发明涉及一种通过紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，属于大分 子检测领域。

背景技术

壳聚糖(chitosan)为甲壳素的降解产物。化学名称为聚葡萄糖胺(1，4)-2-氨基 -2-脱氧-D-葡聚糖，是甲壳类(虾、蟹)动物、昆虫的外骨骼的主要成分，壳聚 糖在自然界中分布广泛，属于高分子绿色材料。有关人类对壳聚糖的认识是从19 世纪开始的，到本世纪60年代，对甲壳素/壳聚糖的研究才变得日益活跃。国际 上，从1894年以来，已召开过6次有关甲壳素/壳聚糖的会议；亚洲也于1994 年举办了首届甲壳素学术会议，现已举办2次。而我国只是在最近几年才对甲壳 素/壳聚糖的开发及应用予以重视。1996年10月在大连召开了第一届甲壳素化学 学术会议。壳聚糖及其衍生物在食品、医药、环保、化工等行业有着广阔的应用 前景。壳聚糖具有很好的生物相容性和生物活性，无毒、无害、无免疫抗原性， 对人体具有强化免疫、抑制老化、预防疾病、促使疾病痊愈、调节生理机能五大 功能。市面上的壳聚糖产品参差不齐，配方不一，壳聚糖所占的含量直接影响到 其功能的发挥。因此，建立准确的定量分析方法，对保障产品质量的稳定性和可 控性都至关重要。

目前，壳聚糖分析研究及测定的方法主要有分光光度法、荧光分析法、电化 学法、红外光谱法测、液相色谱法、气相色谱法等。如韩美娜]等人研究建立荧 光淬灭法测定壳聚糖凝胶膜中壳聚糖的含量，利用壳聚糖在PBS缓冲溶液中对 异硫氰酸荧光素(FITC)具有明显的荧光淬灭作用，且荧光淬灭程度与壳聚糖 的量在一定范围内呈线性关系，从而建立了荧光淬灭法测定壳聚糖含量。商军和 王蓓两人建立高效液相色谱法测定原料和复合预混料中的低聚壳聚糖含量。谭学 才，麦智彬等人建立了以茜素红(AR)为电活性探针间接测定无电活性的壳聚糖 (壳聚糖)的新方法。由于壳聚糖自身容易降解，且紫外吸收较弱，实验中常采用 酸水解间接比色法进行含量分析，此方法中常常用到浓硫酸，操作具有一定的危险性，并且不适合微量壳聚糖含量的分析检测。气相色谱法测定壳聚糖含量时往 往需要在测定前对壳聚糖进行衍生化处理，操作较为复杂。HPLC法用于壳聚糖 含量测定时通常也是先将壳聚糖进行酸水解后再进行测定。这些酸水解或衍生化 操作过程对壳聚糖含量的测定结果都会有较大影响，一些直接测定壳聚糖含量的 方法逐渐受到关注。

基于此，本发明提供一种通过紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法。

发明内容

为了克服现有技术中对于壳聚糖的含量难以定量，操作技术繁琐的技术不足， 本发明提供一种通过紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，本发明利用 壳聚糖在醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，与萘酚绿B、吐温20溶液反应生成缔合物， 在一定的浓度范围内，其吸光度值随壳聚糖含量的增加而增大，并且呈现一定的 线性关系。以此作为壳聚糖的定量基础，建立了测定壳聚糖的紫外分光光度法， 本方法受壳聚糖的分子量的影响，具有试剂廉价，灵敏度高，重现性好和操作简 便等优点，适合在实际应用中推广使用。

一种通过紫外分光光度法准确测定壳聚糖含量的方法，其包括下述步骤：