[发明专利]用于检测老鼠肉的引物和探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.用于检测老鼠肉的荧光PCR引物和探针，其特征在于，所述引物和探针碱基序列如下：

mus引物F1：5’-ATTCCGCCCAATCACtCAAA ddW-3’(SEQ ID NO.1)；

mus引物R1：5’-TTGGCCTCCGATTCATGTtAAGA ddW-3’(SEQ ID NO.2)；

Mus探针P1：5’-TACTGAATTCTAGTAGCCAAC-3’(SEQ ID NO.3)；

其中，t代表胸腺嘧啶核糖核苷酸，T代表胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸，ddW代表双脱氧核糖核苷酸，探针P1的5’端结合荧光报告基团，探针P1的3’端结合荧光淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述荧光报告基团为VIC，所述荧光淬灭基团选为BHQ或/和MGB。

3.用于检测老鼠肉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1或2所述的引物和探针以及深海火球菌RNase H2酶。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于内控的引物和探针，所述引物和探针用于特异性扩增真核生物的18s rDNA，所述引物和探针序列如下：

18s rDNA引物F2:5’-GGTAGTGACGAAAAATAACAATACgGGACddW-3’(SEQ ID NO.4)；

18s rDNA引物R2:5’-ATACGCTATTGGAGCTGGAAgTACCddW-3’(SEQ ID NO.5)；

18s rDNA探针P2:5’VIC-AAGTGGACTCATTCCAATTA-BHQ MGB-3’(SEQ ID NO.6)。

5.用于检测老鼠肉的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)从样品中提取DNA；

2)以提取的DNA为模板，利用权利要求1或2的引物和探针分别进行荧光PCR扩增反应获得扩增曲线；

3)对扩增曲线分析，确定样品是否含有老鼠肉。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的荧光PCR扩增反应体系为：

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中的荧光PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；95℃变性30s，60℃延伸30s；循环50次。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中扩增曲线的具体分析过程为：当作为内控信号的F2、R2和P2的荧光PCR扩增曲线形成正常对数扩增“S”型曲线时，

1)如果一个样品在采用F1、R1和P1的荧光PCR反应体系内，获得的荧光检测信号形成对数扩增“S”型曲线，则该样本含有老鼠肉；

2)如果获得的荧光检测信号不形成对数扩增“S”型曲线，则该样本不含有老鼠肉。