[发明专利]高效筛选水稻愈伤组织培养基的方法

说明书

本申请公开了一种高效筛选水稻愈伤组织培养基的方法，包括以下步骤：①愈伤组织诱导；②愈伤组织继代；③诱导愈伤组织芽分化之后，再将分化出芽的愈伤置于生根培养基上培养成苗，最后统计出愈率和成苗率。所述步骤①愈伤组织诱导，进一步包括：成熟胚消毒：水稻种子清水冲洗干净，无菌水漂洗3‑5次；用75％酒精处理3‑5min，无菌水漂洗3‑5次；再以5‑10％的次氯酸钠消毒15‑20min，无菌水漂洗4‑5次；无菌滤纸吸干种子，接种至愈伤组织诱导培养基。本发明方法建立了一种可以广适于大部分水稻材料的愈伤诱导方法，不仅可以短时间内得到适合的培养基配方，还可以一次对多个品种进行筛选，省时省力，帮助加快研究进度。

技术领域

本发明涉及分子生物学遗传育种技术领域，特别一种利用三步优化法 高效筛选适于培养水稻愈伤组织的培养基的方法。

背景技术

水稻单产高，种植面积广泛，是全球近50％人口的主要粮食作物。水 稻生产对保障全球粮食安全，解决地区温饱问题和减少发展中国家贫困人 口数量具有重要作用。

然而，由于全球各地区区域发展的不平衡，水稻产业的发展已逐渐产 生了诸多问题，其一，全球范围内还有许多贫困人口和难民，对粮食的需 求量大，还需加强对水稻产业的推广和利用；其二，部分地区人口资源丰 富，自然环境良好，但水稻单产低，造成对土地资源浪费；其三，随着大 众生活水平的提高，对食味良好的优质水稻的需求也是水稻育种行业的另 一大挑战。

要解决以上三大问题，我们必须将研究精力集中在三个方面，继续开 展水稻超高产育种的研究，培育适合于世界各地区气候条件的水稻高产品 种和加大对优质特色稻米的科研投入。

目前，多种水稻基因组测序和遗传图谱绘制已经完成，对水稻功能序 列的解读、功能基因的研究、代谢调控网络的解析必将大大促进水稻多样 性育种的进展，同时，将传统的常规育种方法与分子、细胞研究技术相结 合也是现代作物育种发展的必然趋势，而以组织培养为基础的基因工程将 会成为后基因组时代基因功能验证的必须手段。

因此，如何快速高效的筛选出合适的愈伤组织培养基成为建立基因工 程研究体系的前提。

目前，花药、幼穗、幼胚、成熟胚等材料常被用来诱导水稻的愈伤组 织，其中成熟胚的诱导相对容易，取材不受季节限制，在基因工程利用中

影响水稻愈伤形成和植株再生的主要因素包括外植体基因型、外源激 素、培养基种类以及光周期和继代时间等多个方面。其中材料的基因型和 外源激素的种类、浓度和配比是最主要的因素。前人的研究多集中于单个 水稻品种或某一类籼稻或粳稻的愈伤组织诱导研究中，并不能广适于大部 分水稻品种，筛选时要针对不同的品种，建立多个优化体系，甚至把时间 浪费在非主要影响因素上面，费时费力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于，通过前期大量实验，本发明建立了 一种可以广适于大部分水稻材料的愈伤诱导方法，不仅可以短时间内得到 适合的培养基配方，还可以一次对多个品种进行筛选，省时省力，帮助加 快研究进度。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种高效筛选水稻愈伤组织培养 基的方法，包括以下步骤：

①愈伤组织诱导；

②愈伤组织继代；

③诱导愈伤组织芽分化之后，再将分化出芽的愈伤置于生根培养基上 培养成苗，最后统计出愈率和成苗率。

所述步骤①愈伤组织诱导，进一步包括：成熟胚消毒：

水稻种子清水冲洗干净，无菌水漂洗3-5次；

用75％酒精处理3-5min，无菌水漂洗3-5次；

再以5-10％的次氯酸钠消毒15-20min，无菌水漂洗4-5次；

无菌滤纸吸干种子，接种至愈伤组织诱导培养基。