[发明专利]一种诱导猪肠道自噬模型的构建方法

说明书

本发明公开一种诱导猪肠道自噬模型的构建方法，该诱导猪肠道自噬模型的构建方法包括如下步骤：对试验仔猪进行自噬诱导处理，得到待测仔猪；从待测仔猪的前腔静脉采血并分离血浆，测定血浆中的生化指标；取待测仔猪的肠黏膜样品，观察肠黏膜样品的形态结构，并测定肠黏膜相关蛋白表达。本发明的主要目的是提出一种诱导猪肠道自噬模型的构建方法，旨在成功建立猪肠道自噬模型，且建立方法简单、效果稳定可靠。

技术领域

本发明涉及自噬研究技术领域，特别涉及一种诱导猪肠道自噬模型的构建方法。

背景技术

自噬(autophagy)过程时发生在真核生物中一种进化上高度保守的过程，其主要功能是通过降解并回收和利用细胞内生物大分子乃至受损的细胞器等来维持细胞受到外来刺激甚至破坏后的平衡。真核细胞内物质和能量的分解代谢主要通过两条途径：一是通过泛素蛋白酶体途径，另一个就是自噬途径。

当前，因各种因素导致的猪肠道健康问题仍是制约生猪高效生产的关键，这主要是因为猪肠道功能调控机制十分复杂，支撑肠道研究的相关实验模型比较有限。目前，已有肠道免疫应激模型(如脂多糖刺激)、细菌感染模型(如大肠杆菌K88感染)、病毒感染模型(如猪圆环病毒感染)等，为研究猪肠道功能营养调控机制提供了一些实验模型。基于这些实验模型，人们对猪肠道功能的调控机制有了部分的认识，如mTOR信号通路和EGFR信号通路在肠道生长发育中发挥作用、TLR4/NF-κB信号通路在肠道免疫反应中发挥关键作用、AMPK/ACC信号通路在肠道细胞能量代谢中发挥作用、I型IFN信号通路在肠道抗病毒能力中发挥关键作用、紧密连接蛋白在维护肠道屏障功能中发挥作用等。

但是现有技术中已有利用药物(如雷帕霉素，Rapamycin)诱导大鼠肠道自噬活性增强，但是这种模型存在全身性作用、动物应激大等不足等问题，自噬模型不理想。也有相关文献通过禁食来诱导动物肝脏自噬活性增强，但这种诱导动物肝脏自噬的方式对肠道是否有效尚还不明确，而且还存在禁食动物处于非正常生理状态的问题，因此利用饥饿诱导猪肠道自噬模型也不理想。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种诱导猪肠道自噬模型的构建方法，旨在成功建立猪肠道自噬模型，且建立方法简单、效果稳定可靠。

为实现上述目的，本发明提出一种诱导猪肠道自噬模型的构建方法，包括如下步骤：

对试验仔猪进行自噬诱导处理，得到待测仔猪；

从待测仔猪的前腔静脉采血并分离血浆，测定血浆中的生化指标；

取待测仔猪的肠黏膜样品，观察肠黏膜样品的形态结构，并测定肠黏膜相关蛋白表达。

优选的，所述对试验仔猪进行自噬诱导处理，得到待测仔猪的步骤，具体包括：

对试验仔猪喂含诱导剂的饲料，得到待测仔猪。

优选的，所述诱导剂为含有β－伴大豆球蛋白的饲料。

优选的，所述β－伴大豆球蛋白的饲喂量为仔猪的每公斤体重饲喂2.5g，诱导时长为2天。

优选的，所述含有β－伴大豆球蛋白的饲料为含有β－伴大豆球蛋白的奶水，每顿饲喂的奶水中含有20g奶粉。

优选的，所述对试验仔猪进行自噬诱导处理，得到待测仔猪的步骤之前，还包括：

对试验仔猪喂奶水饲养6天。

优选的，所述对试验仔猪喂奶水饲养6天的步骤，具体包括如下步骤：

在第一天每顿饲喂含15g奶粉的奶水；

在第二天每顿饲喂含18g奶粉的奶水；

在第三天至第六天每顿饲喂含18g奶粉的奶水；

其中，每天饲喂五顿。