[发明专利]裂殖壶菌及其产淀粉酶的应用

说明书

本发明公开了一种裂殖壶菌WZYU003及其生产淀粉酶的应用，将裂殖壶菌通过斜面培养、种子培养和发酵培养即可得到淀粉酶粗酶液。该方法首次使用裂殖壶菌在包含葡萄糖、蛋白胨、酵母粉和海盐等廉价原料的培养基中快速生产淀粉酶，大大降低了生产成本；且整个工艺流程简单，设备要求低，可控性强，适用于工业化生产。利用本发明所述制备方法所得淀粉酶具有较好的温度和pH稳定性,可以满足工业化生产淀粉酶的需求。

(一)技术领域

本发明涉及一种淀粉酶的制备，特别涉及一种利用裂殖壶菌生产淀粉酶的方法。

(二)背景技术

裂殖壶菌(Aurantiochytrium sp.)是一种海洋类真菌的异养型微生物，多分布于环境多变的海洋生境，能够充分利用自身的多酶体系高效分解环境中的各种基质，以适应温度和pH等环境因子的剧烈变化而快速生长。然而来源于裂殖壶菌且具有工业价值的酶制剂并未见报道。

淀粉酶是水解淀粉和糖原类物质的酶的总称，是最早实现工业化生产、应用最为广泛的酶类，广泛应用于食品、纺织、制药、医疗、洗涤、造纸和饲料等领域，也成为工业上用量最多的酶之一。目前工业淀粉酶主要来源于芽孢杆菌属和古细菌等微生物，但目前淀粉酶仍存在不足，如温度pH稳定性不够，以及发酵成本较高等。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种新菌株--裂殖壶菌(Aurantiochytrium sp.)WZYU003及利用裂殖壶菌WZYU003高效生产高稳定性淀粉酶的方法。本发明首次使用已通过食品安全认证的海洋微生物裂殖壶菌，采用廉价原料高效生产淀粉酶，有效降低了淀粉酶的生产成本，且该酶在宽温度和pH范围内均具有较高活性，解决了工业淀粉酶稳定性不足的问题，且整个工艺流程简单，设备要求低，可控性强，适用于工业化生产。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株新菌株--裂殖壶菌(Aurantiochytrium sp.)WZYU003，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:M 2016618，保藏日期为：2016年11月7日，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。

本发明还提供一种利用裂殖壶菌WZYU003生产淀粉酶的方法，所述方法为：将裂殖壶菌WZYU003接种至发酵培养基中，在20-35℃下，50-600rpm振荡培养，得到发酵液，将发酵液离心，弃细胞沉淀，得到含淀粉酶的粗酶液，将粗酶液分离纯化，获得淀粉酶；所述发酵培养基组成为：葡萄糖20-120g/L，酵母粉10-60g/L，蛋白胨0-20g/L(0是指不含蛋白胨的情况，含有蛋白胨时，含量为5-20g/L)，海盐20g/L，溶剂为水，pH值自然。

进一步，所述裂殖壶菌WZYU003接种前先进行平板活化和种子扩大培养：(1)平板培养：将裂殖壶菌WZYU003接种于平板培养基，30℃下培养2-3天；所述平板培养基组成为：葡萄糖20g/L，酵母粉10g/L，蛋白胨5g/L，海盐20g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH值自然；(2)种子培养：将平板菌体接入含100mL种子培养基的500mL三角瓶中，在30℃下，200rpm震荡培养1-2天，得到种子液；所述种子培养基组成为：葡萄糖60g/L，酵母粉10g/L，蛋白胨5g/L，海盐20g/L，溶剂为水，pH值自然。

进一步，所述裂殖壶菌WZYU003发酵培养方法为：将种子液接入含发酵培养基的发酵罐中，在20-35℃下，转速50-600rpm，通气量20-100L/min，溶氧量10-60％的条件下，培养时间1-6天，获得发酵液，更优选发酵条件为：25-32℃，转速100-400rpm，通气量20-80L/min，溶氧量20-50％，培养时间3-5天。

进一步，所述种子液以体积浓度的1％-20％的接种量接种至发酵培养基。