[发明专利]一种对引物测序的方法有效
| 申请号： | 201711490028.8 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN107937503B | 公开（公告）日： | 2018-10-26 |
| 发明（设计）人： | 窦坤 | 申请（专利权）人： | 北京睿博兴科生物技术有限公司广州分公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 佛山帮专知识产权代理事务所(普通合伙) 44387 | 代理人： | 颜春艳 |
| 地址： | 510535 广东省广州市黄*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 测序 对引物 通用引物 基因工程 检测结果 生物诊断 药物研发 质粒模板 碱基 可用 研发 应用 | ||
1.一种对引物测序的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：在扩增体系中，以引物Z和引物Y2作为PCR引物对，将质粒模板DNA经PCR扩增出模板DNA1，然后采用琼脂糖凝胶电泳法回收模板DNA1；
步骤二：在扩增体系中，以引物X和引物Y2作为PCR引物对，将模板DNA1经PCR扩增出待测DNA2，然后采用琼脂糖凝胶电泳法回收待测DNA2；
步骤三：将待测DNA2的原液稀释至浓度为2.5～5ng/ul，然后，使用引物Y2对待测DNA2进行Sanger法测序，即测得引物X的序列；
其中，所述引物X为待测序的引物；所述引物Y2为一条已知的通用引物；所述引物Z由所述引物X的3'端连接引物Y1构成，所述引物Y1为另一条已知的通用引物；
其中，所述步骤一中的扩增体系包含：
其中，所述步骤二中的扩增体系包含：
2.根据权利要求1所述的对引物测序的方法，其特征在于，所述模板DNA1为200～700bp的DNA片段。
3.根据权利要求1所述的对引物测序的方法，其特征在于，所述待测DNA2为700～800bp的DNA片段。
4.根据权利要求1所述的对引物测序的方法，其特征在于，所述步骤一和所述步骤二中各自实施的PCR扩增的反应程序为：
预变性：95℃ 5min
循环30次：95℃ 变性30s
55～65℃ 退火30s
72℃ 延伸30～40s
末次延伸：72℃ 7min
4℃ hold。
5.根据权利要求1所述的对引物测序的方法，其特征在于，在所述步骤一采用的琼脂糖凝胶电泳法中，琼脂糖凝胶的质量体积浓度为0.8％。
6.根据权利要求1所述的对引物测序的方法，其特征在于，在所述步骤二采用的琼脂糖凝胶电泳法中，琼脂糖凝胶的质量体积浓度为1.8％。
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