[发明专利]PD1单链抗体在大肠杆菌中的制备方法有效
| 申请号： | 201711486703.X | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109988238B | 公开（公告）日： | 2020-12-25 |
| 发明（设计）人： | 王涛;吴小燕;张瑶瑶;涂厚安 | 申请（专利权）人： | 上海美迪西生物医药股份有限公司;美迪西普亚医药科技（上海）有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/28 | 分类号： | C07K16/28;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/70 |
| 代理公司： | 上海瀚桥专利代理事务所(普通合伙) 31261 | 代理人： | 郑优丽;熊子君 |
| 地址： | 201299 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pd1 抗体 大肠杆菌 中的 制备 方法 | ||
1.一种PD1单链抗体片段，其特征在于，氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示。
2.一种使用大肠杆菌表达系统制备权利要求1所述的PD1单链抗体片段的方法，其特征在于，包括：
（a）将N端带有信号肽的PD1单链抗体的氨基酸序列的基因克隆于带有启动子的表达载体内构建重组表达载体；
（b）将所得的重组表达载体转座至感受态细胞中，筛选重组菌斑，提取重组质粒，并将其转染至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，得到重组细菌进一步筛选，放大培养细菌以表达PD1单链抗体蛋白，离心收集含PD1单链抗体蛋白的菌体；
（c）将所得菌体破碎后，分离、纯化得到PD1单链抗体片段。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤（c）包括：将所得菌体破碎后，首先使用膜包进行超滤浓缩和置换缓冲溶液，然后色谱柱纯化。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，在步骤（a）中，所述信号肽为PelB。
5.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，在步骤（a）中，所述重组表达载体为pET22B，包括：一个启动子、复制子、多克隆酶切位点和两个终止子，所述启动子为T7启动子。
6.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，在步骤（b）中，所述感受态为Top10。
7.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，在步骤（b）中，转染所用试剂为CaCl2。
8.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，在步骤（b）中，所述重组细菌，在37℃培养至OD=0.7±0.3时，添加0.1-1mM的异丙基硫代半乳糖苷，并将培养液转移到16℃诱导表达12～24小时。
9.根据权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，在步骤（b）中，放大培养细菌并表达所用的培养基为LB培养基。
10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤（c）中，所述色谱柱纯化包括亲和柱层析和分子筛介质层析；其中所述亲和柱层析的亲和介质为Ni-NTA；所述分子筛介质层析的分子筛层析介质为SuperdexTM 75。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海美迪西生物医药股份有限公司;美迪西普亚医药科技（上海）有限公司，未经上海美迪西生物医药股份有限公司;美迪西普亚医药科技（上海）有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711486703.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：检查点调节物拮抗剂
- 下一篇：一种C反应蛋白基因重组单克隆抗体及其制备方法
